【摘 要】
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目的 研究溶质载体家族27成员5(Solute Carrier Family 27 Member 5,SLC27A5)在肝癌发生发展中的作用及其分子机制。方法 利用TCGA数据分析肝癌与癌旁组织中SLC27A5表达情况及其与预后的关系,并在临床肝癌标本中进行Western Blot和免疫组化验证；利用重组腺病毒和CRISPR/Cas9系统,分别建立SLC27A5过表达和基因敲除两种细胞模型,通过M
【机 构】
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重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆400010
【出 处】
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中国生物化学与分子生物学会第十二届会员代表大会暨2018年全国学术会议
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目的 研究溶质载体家族27成员5(Solute Carrier Family 27 Member 5,SLC27A5)在肝癌发生发展中的作用及其分子机制。方法 利用TCGA数据分析肝癌与癌旁组织中SLC27A5表达情况及其与预后的关系,并在临床肝癌标本中进行Western Blot和免疫组化验证；利用重组腺病毒和CRISPR/Cas9系统,分别建立SLC27A5过表达和基因敲除两种细胞模型,通过MTS、EdU和克隆形成实验观察SLC27A5对肝癌细胞增殖的影响,通过裸鼠皮下成瘤和肝原位移植瘤模型观察SLC27A5对肿瘤增殖的影响；利用RNA-Seq技术分析SLC27A5调控的靶基因,q-PCR、Western Blot和IHC技术证实SLC27A5对靶基因的调控；利用抗氧化反应元件(Anti-oxidant response element,ARE)-荧光素酶活性报告系统、q-PCR和Western Blot检测Keap1/Nrf2信号通路的活化状态；利用CellROX？ Orange探针,丙二醛(MDA)检测试剂盒和4-羟基壬烯酸(4-HNE)抗体分别检测细胞内活性氧(ROS)和脂质过氧化水平；利用超高效液相色谱-串联质谱/质谱法(UPLC-MS/MS)测定4-HNE对Keap1蛋白半胱氨酸残基的修饰；肝癌细胞、裸鼠皮下成瘤和肝原位移植瘤模型中,观察沉默TXNRD1联合索拉菲尼处理对肝癌细胞和肿瘤增殖和凋亡能力的影响。
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