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目的：以VEGFR-3为靶点,克隆小鼠VEGFR-3胞外区基因片段,构建重组质粒pcDNA3.1-VR-3,以减毒沙门氏菌SL3261为载体,制备口服VEGFR-3DNA疫苗,研究其抑制肿瘤血管和淋巴管生成的作用和机制,观察其对小鼠Lewis肺癌移植瘤模型的免疫治疗效果.
方法：1)提取C57BL/6胎鼠总RNA,采用RT-PCR技术,克隆小鼠VEGFR-3胞外区cDNA全长序列.以质粒pcDNA3.1为载体，构建重组质粒pcDNA3.I-VR-3，经脂质体介导转染COS-7细胞，Western blot检测其蛋白表达;2)将pcDNA3.1-VR-3分别转化感受态减毒沙门氏菌SL3261，制备以SL3261为载体的口服VEGFR-3 DNA疫苗，免疫C57BL/6小鼠，动态观察血中特异性抗体水平、特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外杀伤活性，检测疫苗的免疫生物学活性;3)在口服DNA疫苗抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤血管和淋巴管生成作用的实验研究中，选30只C57BL/6小鼠随机分为联合疫苗组、空质粒组和生理盐水组，两周内各口服三次;最后一次接种结束2周后，3LL细胞皮下接种，建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型，记录移植瘤生长情况、体积、湿重;分别于接种疫苗前、后以及接种3LL细胞后，采用流式细胞术测小鼠外周血CD3+和CD8+值;接种3LL细胞28天后处死全部小鼠，取出肿瘤，称重，拍照，测体积，并进行组织病理学检查，免疫组织化学法计数肿瘤微血管密度（MVD）和微淋巴管密度（LVD），研究疫苗对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用.
结果：1)克隆了VEGFR-3胞外区cDNA全长序列，并构建了重组质粒pcDNA3.1-VR-3, Western blotting证实目的基因可在COS-7细胞中表达;2)成功制备了以SL3261为载体的口服VEGFR-3 DNA疫苗。疫苗组的抗体水平和空质粒组、生理盐水组比较，均有明显差异(P<0.05);特异性细胞毒性T淋巴细胞体外杀伤活性实验结果显示:效靶比为10:1时，疫苗组小鼠脾淋巴细胞对MS1的杀伤率和对照组之间没有明显差异(P0.05)。
结论：成功制备了以VEGFR-3为靶点的口服DNA疫苗;该疫苗能激活机体特异性的体液免疫及细胞免;该疫苗能通过抑制肺癌血管生和淋巴管生成而抑制小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的生长，抑制原位肺癌模型和肺转移瘤模型肺癌的生长和转移;该疫苗能延长Lewis肺癌模型小鼠的生存时问。