【摘 要】
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目的 近年研究发现泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasomes system,uPs)在阿尔茨海默症(Alzhei-mers disease,AD)发病中起重要作用,但其详细机制还未明确.本课题组通过
【机 构】
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山东省高校动脉粥样硬化重点实验室,泰山医学院动脉粥样硬化研究所,山东泰安271000
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目的 近年研究发现泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasomes system,uPs)在阿尔茨海默症(Alzhei-mers disease,AD)发病中起重要作用,但其详细机制还未明确.本课题组通过培养人神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y,观察不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132对细胞凋亡及B淀粉样蛋白(βamyloid,Aβ)代谢的影响,以期为阐明UPs在AD中的作用及机制提供依据.方法 培养SHSY-5Y细胞,MG132对细胞进行处理,浓度分别为2.5 μmol·L-1、5 μmol·L-、10 μmol·L-1,24后检测各项指标.流式细胞术检测细胞凋亡；Elisa法检测细胞Aβ40 、Aβ42水平；Western blot检测β淀粉样蛋白前体蛋白(APP),β-分泌酶(BACE1),y-分泌酶相关组分早老蛋白1(presenilins,,Ps1)、早老蛋白2(presenilins2,Ps2)、Nicastrin (NCT),α-分泌酶(ADAM10)等蛋白表达.结果 细胞经MG132处理后,细胞活力下降,明显诱导细胞凋亡,随剂量增加凋亡率分别为36.97％、46.2％、50.5％；经MG132处理后,细胞Aβ42、Aβ40蛋白水平明显上升；APP及Aβ代谢相关蛋白PS1、PS2和BACE1表达均出现剂量依赖性的增加,而ADAM10表达呈剂量依赖性降低；NCT水平变化不明显.结论 MG132能诱导神经细胞凋亡,通过影响Aβ生成途径关键蛋白而干扰其代谢,说明蛋白酶体活性下降,可能通过促进Aβ的产生进而参与AD发生.
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