表达短Lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制BmNPV增殖研究

来源 :全国家蚕病害控制技术与安全养蚕模式学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aurogon1
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为了探讨RNAi 抑制家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的效果,用带有lef-1 dsRNA表达盒的转基因 载体pigA3-LEF-Neo转染家蚕BmN培养细胞,通过G418(750-800μg/mL)筛选,获得了稳定转化细胞系。 病毒感染试验显示,稳定转化细胞的病毒感染率比正常细胞低53%,转化细胞形成的多角体数量大 约为普通细胞中的2/3,细胞培养上清中的游离病毒减少了90%,表明病毒在转化细胞中的增殖受到明显抑 制;半定量RT-PCR 结果显示,转化细胞中病毒lef-1 的转录水平仅为正常细胞的2/5-3/5,表明转化细胞 表达的lef-1 dsRNA 抑制了病毒lef-1基因的表达同时将pigA3-LEF-Neo载体导入蚕卵,通过G418 和绿色荧光的双重筛选,并经分子生物学鉴定获得了转基因家蚕。G6代的转基因系统抗性鉴定结果显示, 除G6-B1外,转基因家蚕对BmNPV的半数致死浓度也提高了大约2-4倍,感染死亡率下降了5%-30%。
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