【摘 要】
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由结核分枝杆菌引起的结核病是一种慢性传染性疾病，是单病原菌引起的世界上死亡人数最多、造成危害性最大的传染性疾病，研制和开发预防结核病的新型疫苗对于有效控制结核病具有重要的公共卫生意义.本研究通过同源重组技术，将结核分枝杆菌重要保护性原FbpB和ESAT-6定点整合到减毒李斯特菌菌株LM△actA/plcB的基因组中，获得分泌表达融合蛋白FbpB-ESAT-6的重组菌LM∷ fbpB-esat-6.
【机 构】
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扬州大学,江苏省人兽共患病重点实验室,江苏省动物重要疫病和人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州,225009
【出 处】
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2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微
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由结核分枝杆菌引起的结核病是一种慢性传染性疾病，是单病原菌引起的世界上死亡人数最多、造成危害性最大的传染性疾病，研制和开发预防结核病的新型疫苗对于有效控制结核病具有重要的公共卫生意义.本研究通过同源重组技术，将结核分枝杆菌重要保护性原FbpB和ESAT-6定点整合到减毒李斯特菌菌株LM△actA/plcB的基因组中，获得分泌表达融合蛋白FbpB-ESAT-6的重组菌LM∷ fbpB-esat-6.体内感染动态试验、LD50的测定及病理切片结果均表明该重组菌具有极高的安全性.以C57BL/6小鼠为模型，通过滴鼻、口服、尾静脉、皮下、腹腔五种免疫途径，对重组菌诱导的免疫应答进行了测定，结果显示，五种免疫方式都能有效地激发结核抗原特异性的Th1型细胞免疫应答，其中尾静脉途径免疫所激发的细胞免疫应答水平最高.以酶联免疫斑点试验(ELISPOT)对尾静脉免疫途径的免疫程序进行了优化，结果表明加强免疫为最佳免疫次数.在优化的免疫程序下，通过流式细胞术(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT)、夹心ELISA、细胞毒性T淋巴细胞杀伤(CTL)试验及间接ELISA试验，对重组菌诱导的免疫应答机制进行了深入研究.结果表明，重组菌所运送的结核抗原不仅能诱导小鼠产生较强的体液免疫应答，还能促进脾脏淋巴细胞的早期活化和增殖，诱导Th1型免疫应答，激发较强的结核抗原特异性的CTL效应.对免疫小鼠的攻毒实验结果表明，重组菌免疫小鼠后能100％的保护野生型结核分枝杆菌的攻击.总之，重组菌能促进小鼠脾脏淋巴细胞的早期活化和增殖，诱导小鼠产生强烈的Th1型应答和特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性，能保护野生型结核分枝杆菌的攻毒，是一种安全高效的结核病疫苗候选株.本研究将为研制新型结核疫苗奠定基础，也为重要疫病的免疫预防提供新认识和新技术.
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