【摘 要】
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目的 利用同源重组技术构建肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株,初步探讨ampG基因缺失对肺炎克雷伯菌AmpC酶诱导表达的影响。方法 PCR分别扩增实验菌株ampG上下游同源臂片段
【出 处】
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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
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目的 利用同源重组技术构建肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株,初步探讨ampG基因缺失对肺炎克雷伯菌AmpC酶诱导表达的影响。方法 PCR分别扩增实验菌株ampG上下游同源臂片段,再利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)技术获得apG基因上下游同源臂融合片段,酶切后克隆至温敏性自杀载体pKO3-km上,构建pKO3-km-ΔampG重组质粒,电转肺炎克雷伯菌Kp1和Kp NTUH-K2044菌株中,通过同源重组技术,利用pKO3-km的温敏特点,筛选出肺炎克雷伯菌ampG基因缺失的突变株；将克隆质粒pACYC 184-ampCR分别导入Kp NTUH-K2044的野生型及其ampG基因缺失菌株中,使其获得AmpC酶基因；采用纸片扩散法,头孢西丁为诱导剂,观察ampG基因缺失前后对肺炎克雷伯菌AmpC酶诱导表达的影响。
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