【摘 要】
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目的：建立HPLC库仑电化学方法测定四君子汤干预的脾虚大鼠不同脑区单胺类神经递质含量.方法：动物雄性SD大鼠,体质量180～200g,60只,由北京维通利华实验动物技术公司提供(SCXK(京)2002-0003).将60只大鼠分为空白对照组、脾虚组和四君子汤组,每组各20只.取大鼠,断头处死,迅速打开颅腔,取出全脑,在冰台上取双侧脑组织海马、下丘脑和纹状体,加1mL 0.4mol/LHClO4,在
【机 构】
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首都医科大学宣武医院中心实验室,北京 100053 首都医科大学宣武医院中医科 北京 100053
【出 处】
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2013中国药学大会暨第十三届中国药师周
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目的：建立HPLC库仑电化学方法测定四君子汤干预的脾虚大鼠不同脑区单胺类神经递质含量.方法：动物雄性SD大鼠,体质量180～200g,60只,由北京维通利华实验动物技术公司提供(SCXK(京)2002-0003).将60只大鼠分为空白对照组、脾虚组和四君子汤组,每组各20只.取大鼠,断头处死,迅速打开颅腔,取出全脑,在冰台上取双侧脑组织海马、下丘脑和纹状体,加1mL 0.4mol/LHClO4,在冰预冷下超声匀浆;12000r/min,10min,4℃,离心,取上清液800μL;再次12000r/min,10min,4℃,离心,取上清液700μL;-80℃保存,待测;测定应用美国ESA公司HPLC库仑系统,包括:582型液相色谱泵,Model 542型自动进样器,柱温箱,Model5600A型Coularray电化学检测器,Agilent ZORBAXSB-C18反相柱4.6×150mm,5μm及相同填充材料的预柱;流动相:70mM一水合柠檬酸,70mM柠檬酸钠,97μM EDTA Na2,832μM八烷基磺酸钠,10％甲醇,pH=4.1,0.22μm滤膜过滤;流速:1ml/min;工作电压:500mV;进样量:20μL.柱温为30℃.在线脱气。信噪比为3。标准曲线制备浓度梯度为:2ng/ml,10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,200ng/ml。测定大鼠海马、下丘脑和纹状体中5-羚色胺(5-HT)和多巴胺(DA)的含量。结果:5-HT的线性关系:Y=0.02594X+0.01117,r=0.9999;DA的线性关系:Y=0.03241X+0.03417,r=1.000，线性关系良好。与对照组比较，脾虚组大鼠各脑区内5-HT水平显著升高，DA水平显著下降，两组差异有显著性(P<0.05);使用四君子汤干预后，5-HT和DA水平基本恢复正常，与空白对照组比较，无显著性差别，而与脾虚组大鼠比较，差异有显著性(P<0.05)。结论:使用HPLC库仑电化学方法可以方便精准地测定四君子汤干预的脾虚大鼠不同脑区单胺类神经递质的含量，为中药作用机制的基础研究提供了可靠便捷的方法保障。
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