【摘 要】
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[目的]近年来,免疫学残留检测技术因其高效、特异、快速等优点已经广泛应用于农兽药残留检测.但小分子半抗原物质需偶联到载体蛋白上构成抗体表位后方可建立免疫检测方法
【机 构】
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中国农业大学动物医学院基础兽医系,北京100193
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会
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[目的]近年来,免疫学残留检测技术因其高效、特异、快速等优点已经广泛应用于农兽药残留检测.但小分子半抗原物质需偶联到载体蛋白上构成抗体表位后方可建立免疫检测方法,限制了免疫检测技术的应用的弊端也是该技术下一步研究和发展的方向,同时,快速、灵敏、实用和同步筛检多种未知污染物的检测技术也是下步探索的目标.为了满足多残留检测的需求,研究一种能识别多类药物的抗体是一个好的突破点.借助分子生物学的高速发展,以及多特异抗体在抗肿瘤药物上研究应用,这也为其的构件表达提供了很好的理论基础和发展方向.单链双特异性抗体是在DNA水平上把不同单链抗体片段的基因通过一段链间连接肽连接起来,直接表达成单链的双特异性抗体分子.利用两种不同的单链抗体的VH和VL基因,使其在表达过程中实现重新组合,形成具有双特异性的单链抗体,这种双特异性单链抗体可以同时与两种抗原特异性地结合,用于同时对两大类药物的多残留检测分析.[方法]利用重叠PCR将抗喹诺酮药物单链抗体基因scFv-NOR和抗磺胺类药物的单链抗体基因scFvSMX融合在一起,构造一个抗磺胺类/抗喹诺酮类药物的双特异性单链抗体(bispecific single-chaindiabody,scDb)基因,scDb的连接肽序列为20个氨基酸(G4S)4,在肽链的C端引入His标签及myc标签.[结果]scDb基因连接入载体pJB-33,转化大肠杆菌RV308并诱导表达,经镍柱纯化获得电泳纯scDb蛋白,大小为60KD,产量约为4 mg/L发酵液.通过建立简单的ci-ELISA方法,scDb与喹诺酮类药物的结合与亲本scFv-NOR相当,与磺胺类药物的结合略低于亲本scFv-SMX相当,其IC50在0.3-100 ng/g之间.[结论]构建的scDb可与喹诺酮类药物和磺胺类药物两种抗原特异性结合,可用于进一步的残留检测研究.
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