【摘 要】
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目的：通过新型高通量筛选技术研发针对胃癌细胞表面新型靶点标志物的功能性单克隆抗体。方法：贴壁肿瘤细胞系培养于5%FBS无血清MD6培养基，悬浮细胞则培养于5%FBS有血清MD6培
【机 构】
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上海交通大学医学院附属瑞金医院 200025
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目的：通过新型高通量筛选技术研发针对胃癌细胞表面新型靶点标志物的功能性单克隆抗体。方法：贴壁肿瘤细胞系培养于5%FBS无血清MD6培养基，悬浮细胞则培养于5%FBS有血清MD6培养基。使用四种胃癌活细胞(MKN45、SGC7901、NGC823及MKN28)免疫A/J小鼠并通过标准化工艺流程制备筛选杂交瘤单克隆抗体。应用免疫荧光技术对#57单抗对应的靶点抗原蛋白进行定位；利用免疫沉淀联合质谱鉴定技术鉴定#57单抗的靶点抗原蛋白；利用RT-qPCR和Western blot技术分别从mRNA和蛋白质水平检测靶点蛋白在胃癌细胞系中的表达；利用Transwell小室实验检测#57单抗是否具有抑制胃癌细胞迁移和侵袭能力。结果：筛选出包括#57单抗在内的几株胃癌特异性单克隆抗体，#57单抗可与特定胃癌细胞株、胃癌组织膜蛋白结合，而不与胃部正常组织膜蛋白、胃癌细胞分泌的蛋白如CA15-3、PG-1/2、CEA或幽门螺旋杆菌相结合。
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