实时荧光定量逆转录PCR检测禽白血病病毒J亚群(ALV-J)

来源 :中国畜牧兽医学会2010学术年会暨第二届中国兽医临床大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wanfl1985
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本文将ALV-J NX0101毒株接种1日龄和7日龄SPF雏鸡并设阴性对照组,采用实时荧光定量逆转录PCR方法,定期检测病毒在体内的复制情况。根据Genebank发表的ALV-J env基因保守序列(AY897227)设计一对特异性引物扩增目的基因;根据鸡的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列(K01458),在保守区内设计一对引物扩增内参基因,分别转入质粒作为标准品制作标准曲线,采用SYBR Green I染料建立荧光定量PCR法,并对方法的特异性,敏感性,重复性进行评价.结果表明:标准曲线的Ct值与标准品浓度的对数值之间存在线性关系;最低可检测到60个拷贝/反应的病毒数,比常规PCR灵敏度高1000倍。检测结果分别采用绝对定量法和相对定量法进行分析,均达到了良好的效果。通过对病毒含量变化的检测发现,在雏鸡4周龄时,两个接毒组ALV-J病毒突然呈对数式增长。据此分析ALV-J 病毒在体内经过3-4用的潜伏后,突然呈爆发式增长,这种情况可能和临床表现的免疫抑制直接相关;结果还显示,7日龄接毒比1日龄的病毒扩增更加显著。本研究建立了一种特异性强、敏感性高、可定量分析ALV-J病毒增殖的方法,为进一步相关研究奠定了基础。
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