【摘 要】
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黄病毒基因组cDNA克隆在大肠杆菌中易于出现碱基替换、核苷酸缺失和外源序列插入等不能稳定遗传现象.为探求病毒基因组中原核启动子和相关序列对该现象的影响,以猪源乙型脑炎
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,上海 20041
【出 处】
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第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
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黄病毒基因组cDNA克隆在大肠杆菌中易于出现碱基替换、核苷酸缺失和外源序列插入等不能稳定遗传现象.为探求病毒基因组中原核启动子和相关序列对该现象的影响,以猪源乙型脑炎病毒HEN0701株基因组nt l.2913克隆pTHENCI为研究对象,利用软件寻找影响病毒cDNA稳定性的相关序列,验证该序列对病毒cDNA克隆稳定性的影响,并对其进行定点突变和启动子活性的测定.结果表明,基因组E蛋白编码区和5 UTR音13分序列对cDNA克隆稳定性有重要影响,于基因组nt 1275与nt 1600之间截断E基因可以稳定cDNA克隆,且基因组nt 54-120序列具有原核启动子活性,于nt 90做A-C突变可降低启动子活性,但不能稳定克隆;于基因组转录起始密码子处(nt97-99)做ATG-GCG突变显著降低启动子活性,并使cDNA克隆在宿主菌中稳定传代.
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