【摘 要】
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目的 本研究将通过Wistar大鼠在体构建原位大肠癌的实验动物模型,探讨高脂饮食状态下肠道肿瘤的发生情况及肠道菌群结构的改变与大肠癌发病风险之间的相关性.方法 (1) Wistar大鼠随机分组后分别给予高脂饮食(HFD)和普通脂肪饮食(SD),并于第5周起予肿瘤组大鼠腹腔注射1,2-二甲基肼(DMH)40mg/kg,予对照组大鼠腹腔注射EDTA+生理盐水,连续注射10周.于第12周起每组间隔2周处
【机 构】
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上海交通大学附属第六人民医院外科,上海200233 上海同济大学附属第十人民医院外科,上海2000
【出 处】
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中华医学会肠外肠内营养学分会第八届全国肠外肠内营养学术大会
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目的 本研究将通过Wistar大鼠在体构建原位大肠癌的实验动物模型,探讨高脂饮食状态下肠道肿瘤的发生情况及肠道菌群结构的改变与大肠癌发病风险之间的相关性.方法 (1) Wistar大鼠随机分组后分别给予高脂饮食(HFD)和普通脂肪饮食(SD),并于第5周起予肿瘤组大鼠腹腔注射1,2-二甲基肼(DMH)40mg/kg,予对照组大鼠腹腔注射EDTA+生理盐水,连续注射10周.于第12周起每组间隔2周处死3只大鼠,将全结肠标本取材后剖开记录肿瘤的形成情况并鉴别肿瘤病理性质；(2)将收集的肿瘤标本利用QIAamp DNAMini试剂盒进行基因组DNA抽提；利用1％琼脂糖凝胶电泳检测抽提的基因组DNA,并鉴定DNA含量；对抽提的基因组DNA进行PCR扩增,并用2％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物、继而定量；之后对PCR扩增产物的16S rRNA V3可变区进行焦磷酸测序,通过SILVA数据库将序列进行生物信息学比对,并经Goods coverage、Shannon index、PCA等多种途径对微生物种类进行分类学和多样性比较；比较高脂饮食与普通饮食干预下组织中菌群结构的差异及与肿瘤发生的相关性；结果 (1)实验成功建立了原位大肠癌的肿瘤动物模型,发现HFD干预下的肿瘤发生情况明显高于SD组；(2)测序结果显示高脂能够导致菌群结构失衡,增加大肠癌风险.主成份分析发现不同组的菌群结构存在显著差异；发现SDC组中Firmicutes、Proteobacteria、Spirochaetes 和Actinobacteria丰度显著增加(p＜0.001),而Bacteroidetes、Fusobacteria的丰度在SDT组中明显高于SDC组(p＜0.001),且LEfSe分析发现Fusobacterium可归为组间最主要的差异性属；发现HFDT组中Bacteroidetes、Proteobacteria、Actinobacteria丰度明显增加(p＜0.001),特别是Fusobacteria的丰度显著高于HFDC组(p＜0.001),而Firmicutes、Spirochaetes、Deferribacteres在HFDC中较高(p＜0.001)；发现Fusobacterium可归为两组间最主要的差异性属,且Bacteroides、Actinobacillus、Porphyromonadaceae亦可归为两组间关键的差异菌属；结论 本实验证实HFD能够通过促进肿瘤形成；发现肠道菌群结构发生了显著变化,验证了人群肠癌特征性菌群谱；HFD能够改变肠道菌群结构,增加潜在性致病菌丰度,特别是Fusobacterium,结合高脂状态肿瘤发生情况,提示Fusobacterium在肠癌的进展中起着重要作用.
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