【摘 要】
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目的 研究细胞自噬在门冬酰胺酶杀伤肺癌细胞A549 中的作用。方法 首先,蛋白印迹法(western blot)检测肺腺癌A549 细胞是否为天冬酰胺合成酶相对缺乏的细胞株,再采用不同
【机 构】
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南方医科大学南方医院药物临床试验中心,广州510515
【出 处】
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中国医药教育协会感染疾病专业委员会第二届学术大会、第八届全国侵袭性真菌病实验室诊断及临床治疗新进展研讨会暨2016中国药
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目的 研究细胞自噬在门冬酰胺酶杀伤肺癌细胞A549 中的作用。方法 首先,蛋白印迹法(western blot)检测肺腺癌A549 细胞是否为天冬酰胺合成酶相对缺乏的细胞株,再采用不同浓度的门冬酰胺酶处理A549 和正常肺上皮MRC5细胞72h,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,另使用Annexin V/PI试剂盒检测A549 是否发生细胞凋亡； 然后,western blot 检测经门冬酰胺酶处理的A549 细胞的微管蛋白1 的轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)由胞浆型(LC3-I)向自噬体膜型(LC3-II)的转化,荧光染色标记自噬体的形成；最后,自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)和门冬酰胺酶联合处理A549,western blot 检测LC3-II 的累积,MTT 法检测细胞活性。
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