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目的：本研究旨在通过研究nsEP对人卵巢癌顺铂敏感和耐药细胞株DNA损伤的时间效应,探讨nsEP引起的DNA损伤与细胞死亡之间的相关性.方法：取对数生长期的A2780细胞或者C30细胞制备密度为5×105/ml的单细胞悬液,将细胞置于漩涡混匀器上面混匀后取1ml细胞于24孔板中,每次脉冲处理时每一个24孔板只有一个孔中盛有细胞.然后调整电极间距离为1cm,电压6kV(即场强为6 kV/cm),脉宽为24ns的脉冲电场处理60s.对照组细胞给予假脉冲处理.每个时间点均设有实验组和对照组.1,脉冲处理完毕后,将24孔板中所有的细胞回收到EP管中再次混匀以后用于后续实验.nsEP处理后继续培养细胞于0h、4h、8h、12h和24 h用CCK-8试剂盒测定细胞活性,并计算细胞死亡率.每个时间点均设置有实验组(nsEP处理后)、对照组(nsEP假处理)和空白对照组(不合细胞,仅加入100μl实验用培养基).2,nsEP处理后4h、8h、12h、24 h,采用碱性单细胞凝胶电泳实验(彗星实验)检测细胞DNA损伤.利用CASP软件测定对照组尾DNA的95th百分位数设置为彗星形成的阈值.并测量实验组75th百分位数尾长(Tail Length,TL),尾矩(Tail Moment,TM,尾部DNA％×尾长)和Olive尾矩(OliveTail Moment,OTM,尾部DNA％×尾矩长),并计算彗星形成率(％).结果：1,nsEP处理后0-8 h,C30和A2780细胞的生存率逐渐降低,8-24 h逐渐上升,8h时细胞生存率最低(P＜0.05)：4h(86.46％vs76.29％),8h (78.52％vs65.96％),12h (84.28％vs75.29％),24h (85.11％vs80.87％).C30细胞的生存率高于A2780细胞(P＜0.05).2,从单细胞凝胶电泳结果图可明显看出对照组中A2780和C30细胞均未见彗尾出现.在4h、8h、12h和24h的彗星图像中,A2780细胞的尾长均分别比C30细胞的长.这在某种程度上说明了A2780细胞更易受到nsEP的作用而受到损伤.A2780细胞的死亡率与彗星形成率在4-24 h均高于C30细胞.这又从另一方面证实了A2780的敏感性.统计学分析显示,A2780和C30细胞的死亡率均与彗星形成率呈正相关(r=0.997,P＜0.05；r =0.998,P＜0.05).这说明细胞的死亡与DNA损伤具有相关性.3,A2780和C30细胞的TL、TM、OTM和其75 th百分位数均随时间变化而变化,最大值出现于8h.这说明细胞的损伤于8h时达到了一个高峰,随后的转折有可能是DNA损伤修复机制的启动所致.A2780的TL,TM和OTM均高于C30(P＜0.05).结论：nsEP对顺铂敏感和耐药卵巢癌细胞的DNA损伤具有时间效应；nsEP对人卵巢癌顺铂敏感细胞株和耐药细胞株的DNA损伤效应存在差异,nsEP对顺铂敏感细胞株的损伤高于耐药细胞株；nsEP所致细胞死亡与DNA损伤有关.