【摘 要】
：
为开发新型重组减毒鸡白痢沙门菌口服活疫苗载体.本研究以pcDNA3.1-Zeo(+)质粒为基础,用沙门菌asd 基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建不含抗性基因的真核互补质粒pcD-asd；再将互补质粒pcD-asd 电转入沙门菌ΔcrpΔasdC79-13,构建ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)平衡致死系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因EGFP 克隆入pcD-asd,构建重组菌株
【机 构】
：
河南科技大学动物疫病与公共安全重点实验室,河南 洛阳 471003 河南科技大学动物疫病与公共安全
【出 处】
：
中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九届全国会员代表大会
论文部分内容阅读
为开发新型重组减毒鸡白痢沙门菌口服活疫苗载体.本研究以pcDNA3.1-Zeo(+)质粒为基础,用沙门菌asd 基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建不含抗性基因的真核互补质粒pcD-asd；再将互补质粒pcD-asd 电转入沙门菌ΔcrpΔasdC79-13,构建ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)平衡致死系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因EGFP 克隆入pcD-asd,构建重组菌株ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd-EGFP),感染鸡胚成纤维(CEF)细胞,Western Blot分析该系统递呈外源抗原的能力.PCR、酶切及测序结果表明ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)平衡致死系统构建成功；生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株ΔcrpΔasdC79-13 及野生株C79-13 保持一致；其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化；生长速度也更为缓慢,对氨苄抗生素敏感；重组菌株ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)的LD50 较野生株C79-13 降低了3.4×104 倍；Western Blot 结果发现,重组菌株感染CEF 细胞后,可表达大小约为27KDa EGFP 蛋白.以上结果证实,本研究成功构建了新型重组减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)株,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体.
其他文献
本文主要研究牛种布鲁氏菌2308株和布鲁氏菌2308△omp10缺失株侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7检测4个合成多肽对布鲁氏菌侵染能力的影响,噬菌体展示技术筛选的4种多肽中NS-7H和KL-7H抑制布鲁氏菌2308株和布鲁氏菌2308△omp10缺失株在小鼠巨噬细胞内的生存；MS-7H和ST-7H对布鲁氏菌2308株和布鲁氏菌2308△omp10缺失株在小鼠巨噬细胞内的生存无影响。说明MS-7H
动物分枝杆菌病在世界上仍是最重要的人畜共患病之一.其主要是由结核分支杆菌(MTB),牛结核分支杆菌(MBO)或者鸟分支杆菌(MAV)引起,为了阐明分离于不同地区或不同种属动物分支杆菌病的菌株的致病性差异,我们使用三株分离于不同种属动物的分支杆菌NTSE-3(MTB),NTSE-4(MBO),NTSE-5(MAV)进行小鼠和巨噬细胞感染实验对不同菌株的致病性和免疫应答进行研究.在本研究中，评价了三株
1.Introduction In the south of China,heat stress is a major problem that adversely affects performance and physiological traits of domestic animals.γ-Aminobutyric acid(GABA) is a four-carbon non-prote
Interferon(IFN)is known for its antiviral activity.However,it is surprising that treatment of IFN-α and IFN-β in vitro enhanced replication of porcine circovirus type 2(PCV2),indicating that complex r
朊病毒的感染是以中枢神经系统(CNS)的神经胶质细胞增生,神经元死亡为主要特点.错误折叠蛋白的蓄积可引起神经胶质细胞分泌促炎因子和趋化因子,进而直接或间接的通过促进神经胶质细胞增生和诱导神经毒性加速疾病的进程.最近的研究表明,早期的神经炎症可激活Ｔ细胞核活化因子,从而诱导NF-κB的核移位而促进凋亡.因而,通过有效的治疗方法降低早期的炎症从而抑制Ｔ细胞活化因子对于治疗疾病是十分必要的.本研究结果首
本文选择具有极大生物应用前景的氧化锌纳米颗粒作为研究对象，研究氧化锌纳米颗粒经静脉注射后对小鼠急性毒性作用。所选择的氧化锌纳米颗粒经水热法合成，颗粒尺寸小，为8-10nm，抗菌活性高，具有作为新型抗菌剂研发的前景。水热法合成的氧化锌比商业购买的氧化锌颗粒毒性小，组织形态学结果表明150mg/kg剂量氧化锌可引起肝脏和肺脏的炎症，但低剂量不会对主要器官造成损伤，该结果为指导氧化锌使用剂量提供了参考依
分析单增李斯特菌胞外蛋白的核酸酶酶学特性.单核细胞增生性李斯特菌简称单增李斯特菌，是一种短小的革兰氏阳性菌，是李斯特菌中唯一对人和动物具有致病性作用的亚种，单增李斯特菌已经被世界卫生组织列入四大食源性病原菌之一。李斯特菌病给我国养殖业造成不可估算的经济损失，同时也对我国居民健康带来了巨大威胁。细菌分泌的胞外蛋白在细菌感染宿主中发挥重要作用。本研究结果证实了单增李斯特菌分泌的胞外蛋白具有降解DNA的
本研究建立了沙冬青种子总黄酮纯化工艺，有效提高了其干物质的纯度。通过体内免疫活性调节试验及体外脾淋巴细胞增殖试验，证明沙冬青种子总黄酮在一定浓度范围内，具有明显促进动物机体免疫系统活化和增强机体免疫能力的作用。
为研究鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC 的生物学特性,利用PCR 方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC 基因,构建重组表达质粒pET-32a-FliC,经大肠杆菌Rosetta(DE3)表达、镍离子亲和层析法纯化后用SDS-PAGE 和Western-blot 方法分析.重组蛋白与巨噬细胞RAW264.7 共孵育,ELISA 和CCK-8 法分别检测巨噬细胞细胞因子和巨噬细胞增殖情况.重组蛋白免疫小鼠
(目的)通过构建牛坏死杆菌43K 外膜蛋白(outermembraneprotein,OMP)原核表达载体,进行原核表达并将其纯化,免疫家兔制备多克隆抗体.(方法)针对大肠杆菌具有偏嗜性的密码子进行优化,构建pET-32a-43K OMP 重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌中,经IPTG 诱导进行原核表达,用镍柱亲和层析法进行纯化,应用牛坏死杆菌H05 菌株的天然血清经Western bolt 方法