【摘 要】
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近年来,Aptamer作为一种高亲和力、高特异性的靶向识别分子在生物传感、分子医学等领域受到了广泛关注。特别是由于序列设计灵活、构型变化多样等优点,Aptamer已被成功用于构建一系列高灵敏生化分析新方法和新技术。目前,基于Aptamer的靶标响应机制主要有“结合-洗脱”模式、链置换竞争激活模式和裂开型探针重组装模式等[1]。其中,裂开型Aptamer探针的设计思路为将原序列分裂成两个或多个核酸片
【机 构】
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化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,湖南大学生物学院,生物纳米与分子工程湖南省重点实验室,410082,长沙
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近年来,Aptamer作为一种高亲和力、高特异性的靶向识别分子在生物传感、分子医学等领域受到了广泛关注。特别是由于序列设计灵活、构型变化多样等优点,Aptamer已被成功用于构建一系列高灵敏生化分析新方法和新技术。目前,基于Aptamer的靶标响应机制主要有“结合-洗脱”模式、链置换竞争激活模式和裂开型探针重组装模式等[1]。其中,裂开型Aptamer探针的设计思路为将原序列分裂成两个或多个核酸片段后再利用靶标诱导分裂片段重新组装成完整识别构型。这一策略不仅具有设计简单、适用性强等优点,且由于只有靶标的存在才能诱使Aptamer分裂体形成特殊构型并转换为信号输出,从而有望大大降低非靶刺激的干扰。然而,现已开发的裂开型Aptamer探针种类十分有限,其靶标仍局限于ATP、可卡因、凝血酶等少数生物分子[2],尤其是具有肿瘤细胞靶向识别功能的裂开型Aptamer探针尚未见报道。基于此,本工作即瞄准这一研究空白,选择基于cell-SELEX技术针对CCRF-CEM人白血病细胞筛选的Aptamer Sgc8c为模型,系统开展了裂开型Sgc8c探针的构建和应用研究。首先通过在Sgc8c环部区域的非结合位点设计不同的裂开方式,获得了九组Sgc8c分裂片段。随后采用流式细胞术以识别亲和力为指标进行筛选,成功构建了对CCRF-CEM细胞具有特异性识别能力的裂开型Sgc8c探针。在此基础上,通过采用Cy3-Cy5荧光供受体对分别修饰两条分裂片段,建立了一种基于荧光共振能量转移效应的CCRF-CEM细胞免洗检测方法。同时,利用裂开型Sgc8c探针的识别温敏性特点,发展了一种肿瘤细胞温控捕获与释放方法,有效实现了CCRF-CEM细胞的循环捕获与释放以及混合细胞体系中靶细胞的分离和回收。
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