N端信号肽残余氨基酸对人凝血因子Ⅷ蛋白在毕赤酵母中表达的影响

来源 :全国血液制品学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:CHENYF20000
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目的:比较N端信号肽残余氨基酸对人凝血因子Ⅶ蛋白在毕赤酵母中表达的影响。 方法:构建表达蛋白N端信号肽残余氨基酸不同的两种重组表达质粒pPIC9K/FⅦ和pPIC9K/Clu-A1a-Clu-Ala-FⅦ,电转化入两种毕赤酵母宿主菌cS115和SMD1163,经甲醇利用表型鉴定,挑取Mut+表达阳性重组菌株,甲醇诱导目的蛋白的表达,经Western blot检测蛋白的特异性,以比较N端均一性对目的蛋白表达的影响及其在不同菌株中表达情况的差异。 结果:两种重组质粒在两种酵母菌株中均可表达FⅦ蛋白,N端信号肽残余氨基酸不影响FⅦ蛋白在毕赤酵母中的表达;GS115菌株的表达量高于SMD1163菌株中的表达量。 结论:N端不含信号肽残基结构的重组子在GS115菌株中分泌表达FⅦ蛋白的情况最为稳定,有利干进一步进行人凝血因子Ⅶ在毕赤酵母中表达的研究。
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