【摘 要】
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目的 探讨胆碱能受体激动剂GTS-21体外抗炎效果及其分子作用机制,评价其是否具有治疗类风湿关节炎的潜能.方法以小鼠单核/巨噬细胞细胞系RAW264.7为研究对象,采用不同浓度GTS-21(0,5,10,20和100μM)作用于RAW264.7,以细胞增殖-毒性检测试剂盒(CellCountingKit-8,CCK-8)检测药物细胞毒性.在不同浓度GTS-21作用下,以100ng/mlLP
【出 处】
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中华医学会第十七届骨科学术会议暨第十届COA国际学术大会
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目的 探讨胆碱能受体激动剂GTS-21体外抗炎效果及其分子作用机制,评价其是否具有治疗类风湿关节炎的潜能.方法以小鼠单核/巨噬细胞细胞系RAW264.7为研究对象,采用不同浓度GTS-21(0,5,10,20和100μM)作用于RAW264.7,以细胞增殖-毒性检测试剂盒(CellCountingKit-8,CCK-8)检测药物细胞毒性.在不同浓度GTS-21作用下,以100ng/mlLPS刺激RAW264.7,分别收集细胞上清和基质,以酶连免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassays,ELISA)检测炎性因子表达水平(IL-1β,IL-6和TNF-α),以Westernblot(WB)方法检测炎症信号通路相关蛋白磷酸化NF-κB和磷酸化AKT的表达水平.另外,通过激光扫描共聚焦荧光显微镜法(LaserScanningConfocalMicroscope,LSCM)检测GTS-21对于磷酸化NF-κB入核情况的影响.结果 CCK-8实验结果显示不同浓度GTS-21对RAW264.7细胞无明显增殖毒性.ELISA结果显示GTS-21处理后的RAW264.7中,由LPS引起的细胞炎性因子(IL-1β,IL-6和TNF-α)水平大大降低,且IL-6的降低与GTS-21作用浓度之间呈现剂量依赖性.WB结果显示100μM的GTS-21可以降低NF-κB和AKT的磷酸化水平.此外,LSCM结果显示100μM的GTS-21可以很好的阻止磷酸化NF-κB转移入核.结论 在小鼠单核/巨噬细胞细胞系RAW264.7中观察到GTS-21呈现出很好的抗炎效果,其可通过调控AKT/NF-κB通路来抑制LPS诱发的炎症反应,因此具有一定的类风湿关节炎治疗潜能.
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