【摘 要】
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目的:检测转录因子Oct4转染人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)对其增殖和多向分化能力的影响.方法:采用Admax包装系统构建携带目的基因Oct4和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报
【机 构】
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中山大学光华口腔医学院附属口腔医院牙体牙髓病科
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目的:检测转录因子Oct4转染人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)对其增殖和多向分化能力的影响.方法:采用Admax包装系统构建携带目的基因Oct4和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒载体,以最适MOI转染DPCs,培养1、2、3、5、7、14d后,CCK-8法检测细胞增殖情况;转染DPCs48h后,分别于成牙本质、成脂诱导液中培养21d,采用茜素红、油红O染色,以及实时荧光定量RT-PCR检测各组间成牙本质、成脂分化能力的改变,以Ad5-EGFP和未加病毒组作为对照.结果:利用Admax包装系统成功构建并获得高滴度重组腺病毒载体,CCK8结果显示Ad5-Oct4-EGFP转染组2d起OD值高于对照组,7、14d与对照组相比有统计学差异(p<0.05);矿化诱导21d后,茜素红染色显示Ad5-Oct4-EGFP组与对照组相比,矿化结节数量多且体积大,实时荧光定量RT-PCR结果显示,牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和Ⅰ型胶原mRNA水平高于对照组(p<0.05);成脂诱导后细胞胞体呈立方状,油红O染色显示Ad5-Oct4-EGFP组细胞浆内出现较多红色脂滴,LPL和PPAR y2 mRNA水平较对照组显著上调(P<0.05).结论:转录因子Oct4可通过改善DPCs的增殖和多向分化能力,提高细胞的干性.
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