FPV JL09C2株中REV插入区基因的表达验证

• 作 者: 高丰;潘伟;解胜男;刘文峰;赵魁;贺文琦;成军;
• 机 构: 吉林大学 动物医学学院,吉林 长春 130062
• 出 处: 中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会
• 发表日期: 2014年期

鸡痘是由鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)引起的一种接触性传染病,广泛发生于鸡和火鸡,临床上主要分为皮肤型、黏膜型和混合型三种.在鸡痘流行区域,主要使用鸡痘和鸽痘病毒疫苗进行免疫预防,虽然因普遍采用疫苗免疫接种使鸡痘疫情报道明显减少,但由于病毒变异而导致免疫失败引发鸡痘的病例时有发生.禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因片段整合入鸡痘病毒被认为是鸡痘病毒病毒毒力发生变化的一个原因.但其具体机制目前尚未阐明.研究FPV中REV插入区域蛋白表达情况,是阐明病毒致病性发生改变的首要任务.从FPV JL09C2株扩增获得REV gag和gp90基因片段进行原核表达，以获得蛋白作为抗原，利用ELISA,Westernblot等免疫学方法对该重组鸡痘病毒自然状态下感染宿主后REV基因片段的表达情况进行验证分析;并构建针对REVgag,env和FPVORF 202真核表达载体，利用间接免疫荧光方法对插入REV基因片段的表达情况进一步验证分析。制备REV gag和gp90蛋白单抗，用Western blot实验检测REV gag,env蛋白在鸡痘病毒粒子中的整合情况。
最终成功获得REV gag和gp90的原核和真核重组表达蛋白，FPV JL09C2株的第202开放阅读框的表达失败。利用制备的REV gag和gp90蛋白多抗检测不到重组病毒中的REV gag和gp90蛋白，该结果表明REV gag和gp90蛋白虽然能够表达但并未整合入鸡痘病毒中。