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目的：探索oleandrin体外对成骨肉瘤细胞的抗肿瘤活性及经典Wnt信号通路在该过程中可能发挥的作用.方法：选择2种人成骨肉瘤细胞系U2OS和SaOS-2,体外应用不同浓度oleandrin(0,25,50,75,100nM)干预肿瘤细胞不同时间点(24,48,72h).CCK-8实验检测细胞活力,根据CCK-8结果选择适当的作用浓度和时间,行克隆形成、划痕、Transwell、DAPI染色和流式细胞分析等检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡.双荧光素酶报告基因检测oleandrin和oleandrin+LiCl(GSK-3β抑制剂预先激活Wnt信号)在不同作用浓度和时间下Wnt/β-catenin信号通路活性的变化.半定量RT-PCR和Western检测c-myc,survivin,cyclinD1,MMP-2,MMP-9的mRNA和蛋白表达变化.核浆蛋白分离Western检测关键转录因子β-catenin的亚细胞定位改变.明胶酶谱法分析MMP-2和MMP-9活性变化.结果：不同浓度oleandrin干预U2OS和SaOS-2细胞不同时间,细胞活力受到显著抑制.Oleandrin在低浓度(25nM)抑制细胞的侵袭与迁移,高浓度(50nM)诱导其凋亡.双荧光素酶基因报告显示oleandrin作用U2OS后TOP/FOP比值降低,在应用20mMLiCl阻断GSK-3β预激活Wnt信号通路后,TOP/FOP比值还是在oleandrin干预后出现了降低.50nM浓度的oleandrin干扰U2OS细胞0,24,48h后,总β-catenin蛋白水平和下游靶基因c-myc,survivin,cyclinD1,MMP-2,MMP-9的mRNA和总蛋白水平表达随作用时间下调.核浆蛋白Western结果提示oleandrin干预后β-catenin核内表达降低.明胶酶谱分析显示oleandrin作用后MMP-2和MMP-9酶活性降低.结论：Oleandrin体外对骨肉瘤细胞有抗肿瘤作用,能显著抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭,并诱导细胞的凋亡.该作用可能是由于Wnt/β-catenin信号通路活性受到抑制所致,引起β-catenin的核-浆易位和下游靶基因表达的降低.另外,oleandrin对骨肉瘤细胞侵袭的影响不仅是由于下调了MMP-2和MMP-9的表达,而且还抑制了两者的酶活性.