【摘 要】
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茎瘤芥是重庆市特色农产品,俗称青菜头,不但是世界三大名腌菜之一"涪陵榨菜"的优质原料,而且是营养丰富的时鲜特色蔬菜.十字花科植物根肿病是由甘蓝根肿病菌侵染引起的一种土
【机 构】
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重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆400030
【出 处】
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中国植物病理学会2011年学术年会
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茎瘤芥是重庆市特色农产品,俗称青菜头,不但是世界三大名腌菜之一"涪陵榨菜"的优质原料,而且是营养丰富的时鲜特色蔬菜.十字花科植物根肿病是由甘蓝根肿病菌侵染引起的一种土传病害,严重为害大白菜、油菜、茎瘤芥等十字花科作物,难以防治.已知肿根形成是生长素过度合成造成的,而腈水解酶与生长素合成密切相关,本文旨在对通过茎瘤芥腈水解酶基因表达特点进行研究,以探讨腈水解酶基因的表达与茎瘤芥根肿病之间的关系,为阐明根肿病的致病机理,茎瘤芥抗根肿病分子育种提供试验依据.采用珍珠岩加MS营养液培植茎瘤芥幼苗,苗期浸泡法接种根肿菌休眠孢子囊悬浮液后,定期收集茎瘤芥幼苗根系材料,制备处理组和对照组mRNA,研究腈水解酶在甘蓝根肿病菌接种10d,15d,20d,25d,30d,40d的表达变化情况.设计筛选内参基因和腈水解酶基因扩增引物对,优化退火温度.提取茎瘤芥根总RN,合成cDNA一链为模板,扩增腈水解酶基因cDNA全长;再以筛选的ACT、UBE和RPL2成套稳定表达的内参基因,采用实时荧光定量PCR分析腈水解酶基因mRNA动态表达情况,试验结果显示:BjNIT1在苗期接种根肿菌后20d病株根部,表达量开始增加,而在健株根部20～40d,BjNIT1均维持低水平表达,表明BjNIT1的表达量受到根肿菌的诱导.采用RACE技术获得腈水解酶的核苷酸序列,ORF分别为745bp(BjNIT1),696bp(BjNIT2)和1026bp(BjNIT4),均有加尾信号AATAAA和poly(A)尾巴.研究结果表明,茎瘤芥腈水解酶基因在感病后期上调表达,与茎瘤芥根肿病的发生有关联.
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