【摘 要】
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目的：克隆、表达、纯化原玻璃蝇节杆菌D-氨基酸氧化酶,研究其酶学性质；通过定点突变研究突变位点对其活性的影响。方法：利用PCR技术克隆目的基因,构建D-氨基酸氧化酶表达载体，通过Ni亲和层析法获得D-氨基酸氧化酶蛋白，以酶催化H2O2显色法分析其酶学活性。采用Site-directed mutagenesis技术构建定点突变体,并测定突变蛋白酶活力。结果：D-氨基酸氧化酶在pH9.37,30℃下酶
【机 构】
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河北师范大学生命科学学院, 石家庄 050024
【出 处】
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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会
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目的：克隆、表达、纯化原玻璃蝇节杆菌D-氨基酸氧化酶,研究其酶学性质；通过定点突变研究突变位点对其活性的影响。方法：利用PCR技术克隆目的基因,构建D-氨基酸氧化酶表达载体，通过Ni亲和层析法获得D-氨基酸氧化酶蛋白，以酶催化H2O2显色法分析其酶学活性。采用Site-directed mutagenesis技术构建定点突变体,并测定突变蛋白酶活力。结果：D-氨基酸氧化酶在pH9.37,30℃下酶活力最高，最适底物是D-Met；所构建的十五个突变体都有催化活性。结论：通过PCR成功克隆获得原玻璃蝇节杆菌D-氨基酸氧化酶基因，通过原核表达、纯化获得了D-氨基酸氧化酶，并分析了其酶学特性；定点突变所构建的15个突变体酶蛋白均有活性，其最适底物及最适pH有所变化。
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