大鼠坐骨神经损伤后不同窗吻合术后应用CNTF对脊髓运动神经元保护作用的研究

• 作 者: 孙鸿安;白俊清;程爱国;
• 机 构: 华北煤炭医学院附属医院,河北唐山 063000
• 出 处: 第五届全国灾害医学学术会议暨常州市医学会急诊危重病及灾害医学专业委员会首届年会
• 发表日期: 2009年期

目的: 本研究模拟临床坐骨神经损伤晚来就诊患者,在坐骨神经切断后延迟不同时间窗吻合神经并早期应用睫状神经营养因子(CiliaryNeurotrophic Factor,CNTF)药物,通过与对照组对比.观察CNTF对坐骨神经损伤后不同时间窗吻合术的相应脊髓节段运动神经元的保护及促进周围神经再生的作用。 方法: 192只体重200-250 g的8周龄健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(A组n=12):实验组:坐骨神经切断外膜端-端吻合非用药组(B组n=60)、坐骨神经切断端-端吻合术后CNTF治疗组(C组n=60)、坐骨神经切断外膜端-端吻合术后生理盐水治疗组(D组n=60),其中B、C、D组在切断坐骨神经后.按照延迟手术吻合不同时间点又分为5个亚组:即刻、3d、7d、14d、21d,每组12只大鼠.A组不做任何处理,B、C、D三组均在坐骨神经切断后用10-0线将两断端错开缝于两侧肌肉上,待等不同时间窗满足后行坐骨神经切断处外膜端-端吻合术.C组动物术中在坐骨神经离断处注射CNTF 200ng/kg·d,术后在坐骨神经离断处注射CNTF 100 ng/kg·d,定时定量注射1/日,总注射日4W:D组动物术毕1 h后在坐骨神经离断处注射NS 100 ng/kg·d,定时定量注射1/日,总注射日4W.其他组动物不予药物治疗.BCD三大组分别于吻合木后饲养3d后,五个亚组(即刻、3d、7d、14d、21d)每组随机处死6只动物,取L4-6脊髓节段做Ca2+浓度测定:吻合术后饲养28d后,五个亚组(即刻、3d、7d、14d、21d)每组处死6只动物,取L4-6做HE染色、,TLinel染色:取吻合口处坐骨神经行神经纵切镀银染色. 结果: (1)BGD三组大鼠术后表现:都不同程度的出现烦躁不安、食欲减退、体重减轻,在吻合术后观察期间,B组和D组几乎全部的大鼠双后肢出现肌肉萎缩、末稍水肿、自食、糜烂深达骨质等表现,而C组与B、D组相比,普遍大鼠出现进食早且多,上述症状的程度较低,出现者也能较早的恢复.三组大鼠在3w左右后双后肢的运动功能都有不同程度的恢复,其中C组恢复情况较B组和D组要好,在1-2w左右表现为能够用双后肢爬行,并可短时间站立. (2)脊髓HE染色光镜下,A组运动神经元细胞核呈圆形,蓝色淡染,位于胞体中央.核仁明显,胞质内尼氏体明显,均匀分布.BCD三组运动神经元细胞核偏位,尼氏小体浓缩、减少,细胞数目减少,出现空泡样细胞,BCD三组的延期7d亚组细胞数目有差异,延期7d亚组时C组与B、D组相比,运动神经元细胞数目较其他延期天数组(即刻、3d、14d、21 d)数目最少. (3)3d时Ca2+浓度测定: 3d时取L5为中心1 cm脊髓节段使用原子吸收光谱分析仪做Ca2+浓度测定,按照Ca2+离子质量浓度(μmol/g)=测定液Ca2+离子浓度/样品烘干后的质量×稀释倍数计算公式,C组Ca2+离子质量浓度数值低于BD组,比较各t值均大于等于to.01(10)(3.169)差异有统计学意义. (4)4W时脊髓TUNE/.染色: 光镜下,脊髓运动神经元凋亡细胞阳性表达在细胞核,TUNEI.标记的凋亡细胞特征.细胞核染色质浓聚致密的斑点状,核固缩,细胞皱缩,细胞碎裂.形成凋亡小体(apoptsis body).A组未见阳性细胞,BCD三组的各亚组均可见阳性细胞,且C组阳性细胞数少于B、D两组:7d亚组阳性细胞数目与其他亚组有差异(P