【摘 要】
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目的:分选CD4+CD25Nrp1+T细胞并在体外研究其免疫调节作用.方法:获取C57BL/6 (H-2b)小鼠脾脏和淋巴结,制备单细胞悬液.采用CD4+T细胞分选试剂盒(Miltenyi)阴选CD4+T细胞,之后再采用CD4+CD25+调节性T细胞分选试剂盒(Miltenyi)阳选出CD4+CD25+细胞,在剩余的CD4+CD25-细胞中采用兔抗小鼠Nrp1单抗(AbCam)和山羊抗兔IgG磁珠
【机 构】
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解放军第309医院器官移植研究所泌尿外科 清华大学医学院免疫学系
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目的:分选CD4+CD25Nrp1+T细胞并在体外研究其免疫调节作用.方法:获取C57BL/6 (H-2b)小鼠脾脏和淋巴结,制备单细胞悬液.采用CD4+T细胞分选试剂盒(Miltenyi)阴选CD4+T细胞,之后再采用CD4+CD25+调节性T细胞分选试剂盒(Miltenyi)阳选出CD4+CD25+细胞,在剩余的CD4+CD25-细胞中采用兔抗小鼠Nrp1单抗(AbCam)和山羊抗兔IgG磁珠(Miltenyi)分选出CD4+CD25Nrp1+T细胞.采用BALB/c脾脏细胞(射线灭活)作为刺激细胞,C57BL/6小鼠CD4+CD25细胞作为反应细胞,进行混合淋巴细胞反应,在其中加入不同比例的CD4+CD25Nrp1+T细胞;采用3H胸苷掺入法检测增殖能力;混淋实验结束时收集细胞培养上清,ELISA法检测IFN-γ,IL-17,TGF-β和IL-10的表达.
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