【摘 要】
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目的：探讨L型钙离子通道Cav1.2及其羧基末端DCT在大鼠根尖牙乳头干细胞(SCAP)向成牙本质细胞样细胞分化过程中的作用.方法：利用酶消化法获取大鼠根尖牙乳头干细胞,体外扩增
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目的：探讨L型钙离子通道Cav1.2及其羧基末端DCT在大鼠根尖牙乳头干细胞(SCAP)向成牙本质细胞样细胞分化过程中的作用.方法：利用酶消化法获取大鼠根尖牙乳头干细胞,体外扩增,结晶紫染色检测牙乳头干细胞的克隆形成率；利用慢病毒转染系统介导pLVX-shRNA2,pLVX-IRES-ZsGreen1质粒在牙乳头干细胞中表达,从而构建Cav1.2基因沉默牙乳头干细胞中及羧基末端过表达牙乳头干细胞.荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western检测牙乳头干细胞中Cav1.2沉默效率及羧基末端的过表达效率；成牙诱导体系下诱导Cav1.2基因沉默及羧基末端过表达牙乳头干细胞向成牙本质样细胞分化,应用茜素红染色检测Cav1.2对牙乳头细胞成牙向分化的作用；应用免疫荧光染色法检测牙乳头干细胞成牙向分化过程中羧基末端DCT是否进入细胞核.结果：牙乳头干细胞的克隆形成能力为每200个细胞形成6-10个克隆；PCR,Western显示牙乳头干细胞Cav1.2基因沉默及羧基末端过表达效果良好；在Cav1.2基因沉默及羧基末端过表达牙乳头干细胞成牙向诱导第10天,DSPP基因及蛋白水平均下降,同样茜素红染色显示诱导第10天时,Cav1.2基因沉默组钙化结节形成受到明显抑制,Cav1.2羧基末端过表达组钙化结节的形成也减少.免疫荧光染色结果显示,Cav1.2羧基末端过表达牙乳头干细胞在成牙向诱导第5天时出现核转位.结论：L型钙离子通道Cav1.2及羧基末端DCT在大鼠根尖牙乳头细胞向成牙本质细胞分化的过程中发挥着非常重要的作用.
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