【摘 要】
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目的：环状RNA在食管癌的发生发展中具有重要的调控作用,由于其稳定闭合环状结构而可能成为潜在早期诊断和治疗的生物标志物.本研究通过干预人正常食管上皮Het-1A细胞中hsa_circ_0063865的表达,探索该环状RNA在食管上皮细胞恶性转化过程中的影响,以期为深入研究环状RNA在食管癌发生发展中的作用及早期生物标志物的筛选提供相关参考.方法：将hsa_circ_0063865过表达和低表达慢病
【机 构】
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东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京210009
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的：环状RNA在食管癌的发生发展中具有重要的调控作用,由于其稳定闭合环状结构而可能成为潜在早期诊断和治疗的生物标志物.本研究通过干预人正常食管上皮Het-1A细胞中hsa_circ_0063865的表达,探索该环状RNA在食管上皮细胞恶性转化过程中的影响,以期为深入研究环状RNA在食管癌发生发展中的作用及早期生物标志物的筛选提供相关参考.方法：将hsa_circ_0063865过表达和低表达慢病毒分别转染到Het-1A细胞中,构建该环状RNA稳定过表达和低表达细胞株.利用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力.对过表达和沉默hsa_circ_0063865的Het-1A细胞进行亚硝胺(100 nmol/L)和藻毒素(100 nmol/L)联合染毒,连续染毒40代,用平板克隆和软琼脂实验检测Het-1A细胞恶性转化情况.使用FISH和核质分离实验对hsa_circ_0063865进行细胞定位分析.应用CHIRP探针结合蛋白质谱技术分析hsa_circ_0063865结合蛋白,利用RIP验证蛋白与hsa_circ_0063865的结合.利用Co-IP结合蛋白质谱实验进一步分析hsa_circ_0063865可能参与调控的蛋白复合体.结果：稳定过表达hsa_circ_0063865 的Het-1A 细胞中,hsa_circ_0063865表达上调433.34倍,细胞侵袭增加1.91±0.02倍,细胞迁移增加2.25±0.04倍；稳定低表达hsa_circ_0063865的Het-1A细胞中,hsa_circ_0063865被沉默44.37％,细胞侵袭减少0.82±0.02倍,细胞迁移减少0.85±0.01倍.亚硝胺和藻毒素连续染毒40代时,hsa_circ_0063865高表达显著促进平板克隆和软琼脂克隆形成率,而低表达显著降低平板克隆和软琼脂克隆形成率.FISH和核质分离实验显示hsa_circ_0063865在细胞核和细胞质中均存在表达,质谱结果发现hsa_circ_0063865可与EF1A2和NPM1蛋白结合,RIP实验证实EF1A2和NPM1蛋白可与hsa_circ_0063865结合.EF1A2结合蛋白的质谱结果发现过表达hsa_circ_0063865可促进EF1A2与MYH9蛋白的结合.结论：Hsa_circ_0006865显著影响食管上皮细胞Het-1A迁移和侵袭过程,并可能通过促进EF1A2和MYH9蛋白复合体的形成,影响亚硝胺联合藻毒素诱导食管上皮细胞恶性转化.
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