利用CRISPRCas9技术验证潜在纤毛基因的功能

来源 :第三届全国斑马鱼PI大会暨中国动物学会斑马鱼分会成立大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:goodlyn
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  纤毛是一种非常保守的,广泛分布于人体多种类型细胞表面的细胞器,起着物理化学和压力传感器的作用。近年来许多研究表明纤毛在许多器官发育中发挥着重要的作用,同时它参与了许多重要的信号通路,如 SHH 、Wnt 等。通过对已发表的纤毛相关基因的数据库进行分析并分类,我们筛选出54 个潜在的纤毛基因进行了初步研究。利用CRISPR/Cas 基因编辑技术,我们成功构建了这些基因的斑马鱼突变体。通过对这54 个基因的斑马鱼突变体表型进行分析,我们发现有7 个基因的斑马鱼突变体均出现小眼缺陷。原位杂交表明这7个基因均在斑马鱼眼睛里面有表达。我们对其中5 个突变体进行了进一步的研究,过表达相应突变基因的mRNA 可以分别挽救这些突变体的表型,说明这些表型的确由相应基因的突变引起。同时,也说明这些潜在的纤毛基因对于斑马鱼眼睛的发育起到了重要的作用。另外,我们对gRNA 靶位点的突变效率与染色体核小体分布进行了初步分析,结果表明位点突变效率与核小体分布存在一定相关性。
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