抗传染性胰腺坏死病毒VP2COE蛋白单克隆抗体的制备及应用

来源 :2013年中国水产学会鱼病专业委员会学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sssmickey
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
  本试验利用Ni-NTA亲和层析纯化后的IPNV VP2 COE重组蛋白作为免疫原,免疫8周龄的雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合.采用间接ELISA和有限稀释法筛选杂交瘤细胞,共得到2株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞株,分别命名为5G10和5F3,亚类鉴定均为IgG1亚类.2株杂交瘤细胞的平均染色体数为75~120.
其他文献
鲤科疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)又称锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus,KHV)可造成鲤鱼和锦鲤大规模发病死亡。目前鲤科疱疹病毒3型病毒病已在世界各地广泛流行。鲤科疱疹病毒3型病毒病作为输入型的疾病已严重威胁到我国鲤鱼和锦鲤的养殖安全。我们对我国鲤鱼及锦鲤的主要养殖地区河南和广东进行了鲤科疱疹病毒3型流行病学初步调查,分析了其基因型,探讨该病
本研究从患病锦鲤中分离到一株鲤科疱疹病毒3型(CyHV-3)毒株,命名为HZ419,对该毒株的Marker Ⅰ、Marker Ⅱ位点克隆后测序分析表明,该毒株Marker Ⅰ位点与已报道的日本株和印度尼西亚株相同,表现为Ⅰ++;但其MarkerⅡ位点与日本株或印度尼西亚株不同,表现为一种新的基因型。根据该毒株的序列特点,针对MarkerⅠ、MarkerⅡ位点建立了多重PCR的分型方法,结果显示,该
根据GenBank上公布的鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyhv-2)基因序列,设计合成其膜糖蛋白基因ORF25的特异性引物,以本实验室分离鉴定的Cyhv-2基因组为模板,通过PCR扩增ORF25基因,再将其克隆至PGEX-KG原核表达载体中,成功构建了PGEX-KG-ORF25重组子.后转化大肠杆菌E.coli BL-21菌株,经IPTG诱导,表达了分子量约为42kD的重组蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,
目的 探讨检测锦鲤疱疹病毒三种不同的PCR方法的比较以及不同保存条件对锦鲤疱疹病毒的稳定性的影响。方法: 根据OIE推荐的基因(TK基因和Sph基因),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合酶基因(Sph)和AF411803基因进行PCR检测。采集8条患有锦鲤疱疹病毒病的锦鲤的鳃和肾脏,将每条锦鲤的组织保存在6种不同的条件下,利用PCR方法和鱼原毒组织感染健康鱼检测锦鲤疱疹病毒的活
目前国内己发现至少三种基因型的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)存在,不同基因型之间GCRV编码蛋白存在较大差异.GCRV S6片段推测编码病毒主要外衣壳蛋白,在目前已发现的GCRV中普遍存在,同一基因型内具有高度的保守性.根据基因Ⅰ型GCRV的S6保守序列,分别设计扩增目的条带661bp普通引物(P1、Pz)、扩增目的条带159bp荧光定量引物(F1、F2)和一条
草鱼(Ctenopharyngodon idella)是中国主要淡水养殖鱼类之一,它极易受草鱼出血病病毒(GCHV)感染而死亡.为认识草鱼抗病毒相关基因,实验克隆了CiGig1和CiGig2的cDNA并通过草鱼肾细胞(CiK)转染真核表达载体pcDNA3.1、pcDNA3.1-CiGig1、pcDNA3.1-CiGig2,然后用GCHV刺激,MTT法分析细胞活性,结果证明CiGig1和CiGig2
In 2010, a strain of infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) was isolated from farmed brook trout (Salvelinus fontinalis) in the northeastern area of China and was propagated in epithelioma pap
会议
Chinese giant salamander (Andrias davidianus) hemorrhage is an emerging severe disease caused by an iridovirus belonging to the genus of Ranavirus within family of Iridoviridae.Although several studie
An antigen-capture ELISA for grass carp reovirus 873 (GCRV 873) was developed.The assay employs polyclonal antiserum directed against grass carp reovirus 873.The antigen bound by the capture mAb (16B7
本实验利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616 bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2 COE,转化于大肠杆菌BL21 (DH5α)进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白约78 kD,用镍离子亲和层析柱纯化该蛋白,制备抗血清。间接ELISA结果显示,鼠抗VP2 C