【摘 要】
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目的：过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)是皮肤科常见的系统性血管炎性疾病,常有血管周围白细胞(主要是中性粒细胞及单核细胞)浸润。内皮细胞是一种特殊的细胞类型,一方面它作为循环血与血管壁之间的重要的屏障,是HSP血管损伤的起始部位；另一方面,它能够表达和分泌一系列趋化因子以诱导白细胞的在内皮细胞表面的滚动、牢固粘附及跨内皮迁移,以调节炎症。本研究旨在探索血管内皮细
【机 构】
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四川大学华西医院皮肤性病科 四川大学华西二院公共实验室
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目的：过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)是皮肤科常见的系统性血管炎性疾病,常有血管周围白细胞(主要是中性粒细胞及单核细胞)浸润。内皮细胞是一种特殊的细胞类型,一方面它作为循环血与血管壁之间的重要的屏障,是HSP血管损伤的起始部位；另一方面,它能够表达和分泌一系列趋化因子以诱导白细胞的在内皮细胞表面的滚动、牢固粘附及跨内皮迁移,以调节炎症。本研究旨在探索血管内皮细胞在HSP患者血清环境下,其表达分泌趋化因子的情况及可能的机制。方法：以原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)及人真皮微血管内皮细胞系(HMEC-1)为研究对象。使用MTT法、趋化法(Transwell 小室)、实时荧光定量PCR,夹心法酶联免疫吸附试验,免疫印迹及免疫荧光染色进行实验观察。设立了HSP(急性期及缓解期)组、急性荨麻疹(无血管炎)作为疾病对照,健康对照,重组人肿瘤坏死因子作为阳性对照。结果：各组对HUVECs及HMEC-1细胞的细胞活力无明显影响；HSP急性期可以诱导细胞培养上清对HL-60、THP-1及CEM-C7细胞的趋化且强于荨麻疹及健康对照组；实时荧光定量PCR显示HSP急性期可诱导HUVECs及HMEC-1细胞趋化因子(包括：CCL2/MCP-1、CCL5/RANTES、CXCL8/IL-8、CXCL16/SR-PSOX以及CX3CL1/fractalkine)mRNA表达,不诱导CCL20/MIP3α；且夹心法ELISA显示HSP急性期可诱导内皮细胞分泌CCL2、CCL5、CXCL8、CXCL16及CX3CL1；进一步我们显示ERK1/2及NF-κB抑制剂PD98059及PDTC可抑制上述改变；且免疫印迹显示急性期HSP血清可以诱导及IκBα、ERK1/2磷酸化及总IκBα降解；最后,免疫荧光染色证实急性期HSP血清诱导的HMEC-1核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)P65核转导。由于目前尚无证据显示CCL5、CXCL16及CX3CL1参与HSP发病,我们的研究进一步观察了患者血清CCL5、CX CL16及CX3CL1的水平变化,结果显示在急性期上述趋化因子水平明显升高且与疾病严重程度正相关。结论：本研究首次报道了HSP患者血清CCL5、CXCL16及CX3CL1水平变化,显示其参与了HSP发病,首次提供了直接的证据显示HSP患者急性期血清可以诱导HL-60、THP-1及CEM-C7细胞的趋化； CCL2、CCL5、CXCL8、CXCL16及CX3CL1的mRNA及蛋白表达；其作用可能与活化ERK1/及NF-κB途径有关。
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