稳定表达T-钙粘蛋白人黑素瘤细胞株的建立和鉴定

来源 :2013全国中西医结合皮肤性病学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:alex709
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  目的:为了研究T-钙粘蛋白在人黑素瘤中的作用,建立稳定表达T-钙粘蛋白基因的黑素瘤细胞株.方法:应用脂质体将重组质粒pBudCE4.1-T-cadherin转染到人黑素瘤细胞株A375、M14中,以0.1g/ml、0.2 g/ml、0.3g/ml、0.4g/ml、0.5 g/ml五种浓度的ZeocinTM进行筛选;而后采用荧光显微镜观察、RT-PCR和免疫细胞化学方法鉴定.结果:成功转染pBudCE4.1-T-cadherin的细胞发出红色荧光,转染效率A375为50%-60%、M14约20%.经ZeocinTM筛选,0.3g/L为最佳筛选浓度,0.2g/L为最佳维持培养浓度;细胞经ZeocinTM培养两周后,100%发出红色荧光,经反转录PCR鉴定,可扩增出T-钙粘蛋白mRNA预期的特异片段;免疫细胞化学证实转染pBudCE4.1-T-cadherin的人黑素瘤细胞株A375、M14细胞均表达T-钙粘蛋白,未转染的细胞则不表达.结论:pBudCE4.1 T-cadherin成功转染到A375、M14并能够稳定转录、表达.稳定表达T-钙粘蛋白基因的黑素瘤细胞株建立成功.
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