【摘 要】
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目的 随着社会进步和人们生活水平的提高,各种环境因素(如化学品、辐射等)引发的基因突变及相关疾病已经严重威胁到了人类的生存与发展,对这些环境因素及时进行致突性检测己成为亟待解决的问题。然而现有的基因突变检测方法均存在周期长,费用高,操作复杂,需要较高的操作熟练度才能完成等问题。因此,建立一种简单、灵敏、高效、客观、低费用的体外致突性检测新方法尤为重要。本研究采用酶催化电化学检测系统,跟踪检测了V7
【机 构】
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佳木斯大学药学院 黑龙江佳木斯,154007 佳木斯大学附属第二医院 黑龙江佳木斯,154007
【出 处】
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2016(第二届)毒性测试替代方法与转化毒理学(国际)学术研讨会暨有害结局路径(AOP)与风险评估培训会议
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目的 随着社会进步和人们生活水平的提高,各种环境因素(如化学品、辐射等)引发的基因突变及相关疾病已经严重威胁到了人类的生存与发展,对这些环境因素及时进行致突性检测己成为亟待解决的问题。然而现有的基因突变检测方法均存在周期长,费用高,操作复杂,需要较高的操作熟练度才能完成等问题。因此,建立一种简单、灵敏、高效、客观、低费用的体外致突性检测新方法尤为重要。本研究采用酶催化电化学检测系统,跟踪检测了V79细胞突变过程电化学响应,分析了细胞内嘌呤代谢变化,为以嘌呤为生物标记物的体外哺乳动物细胞基因突变电化学检测方法的建立提供理论和实验基础。方法 取对数期V79细胞,按照1×106个细胞接种于60mm培养皿中24小时后,DMSO为阴性对照组,EMS为药物组,暴露3小时,换完全培养基,培养10天,采用黄嘌呤氧化酶催化电化学检测系统,每隔48小时检测一次细胞裂解液的电化学信号,细胞裂解液中细胞浓度为1×106个/ml,考察细胞内各嘌呤含量变化。结果 V79细胞在暴露致突物EMS后,表达期第3天,加药组与DMSO溶剂对照组的嘌呤含量出现明显差异,加药组黄嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤含量明显增加,且在表达第5天达到最大值。而DMSO溶剂对照组黄嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤含量稍有下降,无最大值出现。由于细胞裂解液中腺嘌呤含量低于检测下限,在EMS药物组和DMSO溶剂对照组中均未检测到腺嘌呤。结论 以V79细胞为模型细胞,以嘌呤为生物标记物,采用酶催化电化学检测系统可以跟踪V79细胞突变,有望实现体外哺乳动物细胞基因突变的电化学检测。
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