【摘 要】
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目的 构建P66shc基因干扰慢病毒载体,导致P66shc基因靶向沉默,为进一步研究P66shc功能奠定基础。方法 筛选3个RNA靶点,命名为P66shc-shc1,P66shc-shc2,P66shc-shc3,与双
【机 构】
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泸州医学院附属医院新生儿科,四川泸州646000
【出 处】
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中华医学会第八次全国围产医学学术会议
论文部分内容阅读
目的 构建P66shc基因干扰慢病毒载体,导致P66shc基因靶向沉默,为进一步研究P66shc功能奠定基础。方法 筛选3个RNA靶点,命名为P66shc-shc1,P66shc-shc2,P66shc-shc3,与双酶切后的pLenR-GPH(含有GFP绿色荧光蛋白表达)连接,转化入感受态的DH5α细胞,挑取阳性克隆测序正确后,与pRsv-REV,pMDlg-pRRE,pMD2G共转染293T细胞,于倒置荧光显微镜下检测GFP的表达,证实病毒包装成功。使用荧光定量PCR及Western-blot技术检测P66shc在分子及蛋白水平的表达,选取有效沉默P66shc基因的P66shc-shc1靶点,为后续试验做准备。结果 成功构建表达P66shc的shRNA慢病毒载体,通过荧光定量PCR及Western-blot技术检测其通过RNA干扰导致P66shc基因沉默。结论 靶向表达P66shc的shRNA慢病毒载体,可通过RNA干扰在分子及蛋白水平导致P66shc基因沉默。
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