【摘 要】
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目的:高效抗病毒疗法(HAART)的应用,导致HIV-1耐药毒株的大量出现并降低了临床疗效。本研究旨在应用寡核苷酸芯片技术,建立一种快速、准确且高通量检测HIV-1逆转录酶基因(RT)耐药性突变位点的方法。方法:通过对中国人群感染者HIV-1 pol基因突变情况进行筛查,选择HIV-1 RT上5个突变频率较高的位点(K103N,V106A/M, Y181C, M184W, G190A/S)。以HI
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所 100850,北京 军事医学科学院放射与辐射医学研究所 100
【出 处】
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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会
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目的:高效抗病毒疗法(HAART)的应用,导致HIV-1耐药毒株的大量出现并降低了临床疗效。本研究旨在应用寡核苷酸芯片技术,建立一种快速、准确且高通量检测HIV-1逆转录酶基因(RT)耐药性突变位点的方法。方法:通过对中国人群感染者HIV-1 pol基因突变情况进行筛查,选择HIV-1 RT上5个突变频率较高的位点(K103N,V106A/M, Y181C, M184W, G190A/S)。以HIV-1野生型为模板构建各位点的突变质粒标准品。针对5个突变位点共筛选出12条寡核苷酸探针,固定在化学修饰玻片上制成HIV-1逆转录酶耐药性突变检测基因芯片。建立芯片的分型标准,评价芯片的灵敏度,并检测139例临床样本,验证芯片特异性。结果:确定了每个位点野生和突变型探针的Cutoff值。临床样本检测中,芯片检测结果与传统测序方法结果的一致率为96％。检测体外转录RNA的灵敏度为10<3>copeis/μl。结论:本文建立的HIV-1逆转录酶基因突变位点检测基因芯片,可快速、准确地同时检测HIV-1感染者体内病毒逆转录酶基因是否发生突变以及突变的类型,可为指导个性化治疗提供及时可靠的指导信息。
其他文献
目的:构建携带HBVC基因的重组MVA假病毒颗粒,为进一步评价其作为基因治疗工具的价值奠定基础。方法:将HBVC基因通过基因重组构建入穿梭载体pSC11,得到质粒pSC11-C,将此质粒转染MVA病毒感染的原代鸡胚细胞单层,通过同源重组得到MVA-C,采用特异性PCR鉴定重组病毒。经过X-gal筛选,9次克隆传代得到单克隆重组病毒。将病毒培养物经蔗糖梯密度离心纯化后滴定病毒滴度。结果:采用PCR和
在检验工作中,经常会遇到溶血的标本,其对很多检验项目如r-GT,乳酸脱氢酶,K等的检验结果的影响已不容质疑,但对ELISA检测乙肝表面抗原是否有影响,虽然很多文献有报导,但说法不一致,本文对溶血标本对ELISA检测乙肝表面抗原是否有影响及标本溶血原因进行讨论交流。
目的:对重组乙肝VR1012/EHNⅡ/前C-C基因疫苗(VEC)中的蛋白酶切位点进行点突变,并通过动物试验研究突变型前C-C基因疫苗的免疫效果。方法:采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151+154(VE2)、151+154+164+167点突变(VE4)2种突变型疫苗,转染HepG2细胞并免疫Balb/c小鼠。通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹、酶免疫斑点、细胞杀
目的：分析丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫吸附(EIA)诊断试剂盒研究进展及EIAgen HCV Ab Kit的可信度。方法:应用考核试剂EIAgen HCV Ab Kit和参比试剂Ortho HCV 3.0 EIA对2881例样本进行检测,检测结果不一致时,应用重组免疫印迹试验(RIBA)确证。结论：试剂EIAgen HCV Ab Kit敏感性100.00％，特异性较好，是一种优秀的抗-HCV
目的:对珠海丽珠试剂公司研发的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)确认试剂盒(中和试验法)进行初步临床试验,观察其应用价值。方法:血清样本来源于本院门诊病人(包括体检者),经用上海科华公司生产的HBsAg ELISA试剂盒测定,结果呈阳性。确认方法参照丽珠公司提供的说明书进行。结果:133例样本中确认为阳性的99例(74.43％),其中有4例常规确认试验结果为"不确定",但经延长时间的确认试验,均确
目的:分析戊型肝炎病毒各生物志物之间关系以及各标志物在早期诊断中的作用。方法:从临床收集急性散发性肝炎患者的血清,用酶联免疫试剂检测戊肝病毒IgG抗体、IgM抗体和抗原,用实时荧光RT-PCR方法检测核酸,比较其相关关系。结果:在121例急性散发性肝炎中,HEV IgM抗体阴性者为51例,其中抗原或/和核酸阳性者占45.1％;IgM抗体阳性者70份,其中抗原或/和核酸阳性者占67.1％。HEV I
目的:建立快速、灵敏、定量检测巨细胞病毒的方法,并形成检测试剂盒。方法:使用TaqMan探针技术,选择保守序列CMV-pp65设计引物,荧光定量病毒载量。对该检测系统进行灵敏度、重复性和特异性等测试,并检测31份临床阳性标本和106份正常献血者标本。结果:检测灵敏度为358copies/ml,CV％值在1％左右,特异性好,临床标本符合率为100％。结论:表明本检测系统特异性好,准确性高,适用于病毒
目的:对研制的丙型肝炎病毒抗体(双抗原夹心)与HCV-IgM检测试剂进行对比,探讨丙型肝炎病毒感染早期诊断意义。方法:收集早期丙型肝炎病毒感染的样品43份,慢性丙肝患者27份,应用建立的丙型肝炎病毒抗体(双抗原夹心)及HCV-IgM检测试剂同时对比检测。结果:建立的丙型肝炎病毒抗体(双抗原夹心)检测试剂与HCV-IgM对早期丙型肝炎病毒感染样品及慢性患者检出符合率均为100％,而间接抗HCV检测试
目的:建立敏感、特异的HIV-1 p24抗原的ELISA检测方法,为试剂盒的研制奠定基础。方法:用纯化的基因工程p24表达抗原免疫小鼠及兔子,获得单克隆及多克隆抗体,用单克隆抗体包被酶标板,辣根过氧化物酶标记多抗,初步建立HIV-1 p24抗原的ELISA检测方法。进一步与美国杜邦公司的HIV-1 p24抗原检测试剂同时检测88份HIV感染者血清和50份健康献血员血清,确定其特异性。采用倍比稀释法
本研究用于评估亚特斯HIV抗原抗体联合检测试剂(第四代)的灵敏度和特异性。该酶联免疫吸附试剂(ELISA)已通过欧盟CE认证，用于检测人类血清或血浆中的HIV-1, HIV-2和0亚型抗体和HIV-l p24抗原。应用205份HIV病人样品、499份普通献血员样品和15份商业途径获得的血清转换盘进行检测并对结果进行综合分析。结果表明Deteca-HIV (v4)是目前通过CE认证、灵敏度最高的HI