【摘 要】
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由于斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)是我国当代水产行业重要的经济养殖鱼类,所以针对其快速、健康地生长和繁育的研究具有重要的意义.研究发现黑色素浓集激素(Melanin concentrating hormone,MCH)在许多生理内分泌活动中具有重要的调控作用,包括调节动物摄食行为、体重变化、能量平衡、睡眠觉醒、情绪压抑、攻击行为以及鱼类体色变化等功能.MCH主要通过与其受体
【机 构】
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中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广东广州 510275
【出 处】
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第七届全国石斑鱼类繁育与养殖产业化论坛
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由于斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)是我国当代水产行业重要的经济养殖鱼类,所以针对其快速、健康地生长和繁育的研究具有重要的意义.研究发现黑色素浓集激素(Melanin concentrating hormone,MCH)在许多生理内分泌活动中具有重要的调控作用,包括调节动物摄食行为、体重变化、能量平衡、睡眠觉醒、情绪压抑、攻击行为以及鱼类体色变化等功能.MCH主要通过与其受体(Melanin concentrating hormone receptor, MCHR)结合后引发不同的下游反应来发挥调控作用.本文通过对斜带石斑鱼转录组数据和基因组数据的研究分析并结合基因克隆技术,发现与哺乳类不同,斜带石斑鱼具有三个不同受体的亚型基因：MCHR1a、MCHR1b和MCHR2.其中MCHR1a与MCHR1b的同源性较高为73％,其与MCHR2的同源性分别为37％和34％.通过在线网站TMHMMServer v.2.0对斜带石斑鱼这三个受体基因进行了跨膜结构域分析,发现MCHR1a、MCHR1b和MCHR2的结构相似,都具有7次跨膜结构,均属于G蛋白偶联受体超家族.为了研究斜带石斑鱼神经肽MCH1和MCH2与这三种受体的相互作用及其所调控的生理内分泌功能,我们用真核表达载体pcDNA3.1成功表达了斜带石斑鱼的MCHR1a、MCHR1b和MCHR2蛋白,并运用脂质体转染法将这三种pcDNA3.1-MCHRs真核表达载体导入HEK-293T细胞中稳定表达,然后用化学合成的成熟的斜带石斑鱼神经肽MCH1和MCH2分别以不同的梯度浓度刺激培养已稳定转染三种pcDNA3.1-MCHRs载体的293T细胞,通过双荧光素酶报告基因系统检测信号通路中cAMP反应元件(CRE)和血清反应元件(SRE)的表达变化情况,分析斜带石斑鱼MCH与这三种受体MCHRs结合所介导的信号通路类型.结果 显示：斜带石斑鱼神经肽MCH1作用于MCHR1a、MCHR1b和MCHR2后对SRE都具有激活作用,并且作用于MCHR2后抑制了CRE的表达水平；神经肽MCH2作用于MCHR2后改变了SRE的表达水平,而对CRE的作用无明显变化.由此表明,斜带石斑鱼的三种黑色素浓集激素受体MCHR1a、MCHR1b和MCHR2均参与了机体内分泌活动的调控,为进一步研究MCH与MCHR的生理内分泌调控功能奠定了基础.
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