【摘 要】
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饲用抗生素广泛使用造成的药物残留和抗药性等问题已引起广泛关注,减少或禁用饲用抗生素是养殖业面临大趋势.在多种抗生素替代品中,益生菌由于在免疫功能调节、炎症性肠道疾病治疗、肠道应激综合征和腹泻防治等方面发挥重要作用日益受到重视.来源于畜禽动物的益生菌更有利于其适应属主特异性肠道环境从而发挥最大功效,本研究旨在从健康仔猪肠道分离一株具有典型益生特征的猪源乳酸杆菌.首先,采取断奶2周后的健康仔猪肛门处采
【机 构】
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广东省农业科学院动物科学研究所,畜禽育种国家重点实验室、农业部华南动物营养与饲料重点实验室、广东省动物育种与营养公共实验室,广州,510640
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会
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饲用抗生素广泛使用造成的药物残留和抗药性等问题已引起广泛关注,减少或禁用饲用抗生素是养殖业面临大趋势.在多种抗生素替代品中,益生菌由于在免疫功能调节、炎症性肠道疾病治疗、肠道应激综合征和腹泻防治等方面发挥重要作用日益受到重视.来源于畜禽动物的益生菌更有利于其适应属主特异性肠道环境从而发挥最大功效,本研究旨在从健康仔猪肠道分离一株具有典型益生特征的猪源乳酸杆菌.首先,采取断奶2周后的健康仔猪肛门处采集新鲜粪便,经梯度稀释后均匀涂布到Rogosa SL完全选择性培养基上,挑选出疑似菌株106株,经革兰氏染色镜检,筛选得到90株细胞形态呈杆状的阳性菌株.再经抗逆性(pH2.5和0.3％胆盐)筛选,得到16株能耐酸、耐胆盐的候选菌株.候选菌株经16S rDNA序列测序并进行GenBank序列比对,筛选得到1株发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)LF16菌株.采用体外评价方法对L.fermentum LF16菌株的耐酸耐胆盐能力、抑菌活性以及肠上皮细胞的粘附能力等益生特征进行了研究.将L.fermentum LF16菌株接种至pH2.5的MRS酸性培养基和含0.3％胆盐MRS培养基中,37℃培养6h后取样平板计数,考察L.fermentum LF16菌株耐酸耐胆盐能力,结果发现L.fermentum LF16菌株酸性环境和胆盐条件下存活率分别为36.6％和80.2％.采用抑菌圈法研究了L.fermentum LF16菌株对产肠毒素大肠杆菌K88 (ETEC)、金黄色葡萄球菌、野生型猪链球菌2型和野生型猪链球菌D型等猪常见致病菌抑制作用,结果显示L.fermentum LF16菌株对上述各致病菌的抑菌圈分别为11.2mm、9.9mm、14.1mm和17.6mm,抑菌结果表明L.fermentum LF16菌株对常见致病菌均有较强抑菌作用.以肠上皮细胞系IPEC-1细胞作为粘附对象,将浓度为l×108cfu/mL的L.fermentum LF 16菌株添加到贴壁IPEC-1单层细胞的培养皿中,共孵育2h,清洗除去未粘附的细菌,收集细胞并稀释至合适浓度,采用涂布平板计数法计数粘附到IPEC-1细胞上L.fermentum LF16细菌数量,结果发现L.fermentum LF16菌株对IPCE-1细胞具有较强的粘附能力.综上所述,经大规模筛选和体外益生特征评价,我们筛选得到一株猪源发酵乳杆菌L.fermentum LF16菌株,其在抗逆性、抑菌能力以及粘附能力等方面均表现出典型益生菌的基本特征.
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