论文部分内容阅读
目的:探讨骨碎补总黄酮(AFDR)对体外培养转睫状神经营养因子(CNTF)基因成肌细胞增殖、成骨细胞分化的影响,及AFDR促进其向成骨细胞诱导分化的作用机制.
方法:将转CNTF成肌细胞按实验设计分为A、B、C、D、E 5组分别加入相应培养液进行预处理,其中A、B、C组(高、中、低浓度AFDR组):培养液为高、中、低浓度AFDR含药血清+成骨诱导剂;D组(空白血清组):培养液为空白血清+成骨诱导剂;E组(标准培养液组):培养液为完全培养液.连续培养后测定AFDR预处理后转CNTF成肌细胞的增殖、成骨分化情况,并进行统计学分析.
结果:(l)AFDB预处理转CNTF成肌细胞逐渐形成自色钙化结节,以低浓度AFDR组最为明显;(2)不同处理组在同一时间点上MTT测定,低、中浓度AFDR组、空白血清组OD值高于标准培养液组(p＜0.05),其中低浓度AFDR含药血清组的作用最强;(3)碱性磷酸酶染色、茜素红染色、Ⅰ型胶原的免疫组化染色除标准培养液组染色呈阴性外,其余各组转CNTF成肌细胞的胞质中均分别出现紫黑色颗粒或块状沉淀、橘红色的沉淀、棕黄色颗粒沉淀,呈相应染色阳性,且以低浓度AFDR组反应最强;(4)成骨细胞标志物OCN含量、钙沉积量测定、ALP比活性测定在培养早期五组间差异没有统计学意义(p＞0.05),在后期低、中浓度AFDR组、空自血清组中ALP比活性均明显高于高浓度AFDR组、标准培养液组,且低浓度AFDR组ALP比活性明显高于中浓度AFDR组、空白血清组,差异有统计学意义(p＜0.05);(5)在第14d时检测5组Cbfal mRNA、ALP mRNA、PPARγ mRNA表达.结果显示各组间差异均有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01),以低浓度AFDR组对转CNTF成肌细胞向成骨细胞分化过程中相关基因表达的影响最为显著.
结论:1.AFDR含药血清可显著促进转CNTF成肌细胞的体外增殖和成骨分化,且均以低浓度AFDR含药血清作用最强,而高浓度AFDR含药血清抑制其增殖、分化,表明AFDR对转CNTF成肌细胞体外增殖和成骨分化与其浓度相关.
2.AFDR含药血清促进转CNTF成肌细胞体外成骨分化机制与其在成骨分化过程上调Cbfal mRNA、ALP mRNA表达,下调PPA助mRNA表达有关.