肝癌相关标志高尔基体蛋白GP73的基因序列克隆、表达、抗体制备及初步应用

来源 :第二届中国病毒性肝炎和艾滋病实验室诊断与临床高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guoerxong
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目前肝癌的肿瘤标记物只有AFP应用的最广泛,此外在慢性肝炎及肝硬化等良性病例中也有一定的阳性率。需要进一步寻找诊断肝癌的既敏感又特异的早期生物标记。从而及时治疗及预后监测。GP73是一种新发现的高尔基体跨膜蛋白,在病毒感染肝细胞损害时分泌增加,其机制和该蛋白的生物学功能还不清楚。根据文献报道本研究力图建立能够用于临床检测GP73的方法。通过实验研究,获得了与报道序列同源性为100%的GP73基因片段,并通过克隆、表达、纯化获得了GP73的原核表达片段。随后我们通过免疫兔制备、纯化了多抗,并进一步免疫小鼠后建立了杂交瘤细胞系后制备并纯化了单克隆抗体。在标记了多抗后,建立了双抗体夹心检测GP73的ELISA方法。最后,检测了健康人群、慢肝及肝癌患者血清中的GP73,发现各组间阳性率差异显著。本研究为进一步确定对GP73在肝癌早期诊断中意义,奠定了基础。
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