【摘 要】
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背景：血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制剂已被作为一线抗高血压药物,广泛应用于心血管疾病的治疗.然而各种ACE抑制剂50％的副反应发生在皮肤.糖尿病人的治疗中长期服用ACE抑制剂者发生足溃疡和下肢截肢的风险增加.我们前期的研究发现ACE与表皮发育和再生密切相关,但其所起的作用及其机制仍未阐明.目的：本研究旨在观察血管紧张素转化酶抑制剂对创面愈
【机 构】
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暨南大学附属第一医院整形外科,再生医学教育部重点实验室 广州510630
【出 处】
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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会
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背景：血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制剂已被作为一线抗高血压药物,广泛应用于心血管疾病的治疗.然而各种ACE抑制剂50％的副反应发生在皮肤.糖尿病人的治疗中长期服用ACE抑制剂者发生足溃疡和下肢截肢的风险增加.我们前期的研究发现ACE与表皮发育和再生密切相关,但其所起的作用及其机制仍未阐明.目的：本研究旨在观察血管紧张素转化酶抑制剂对创面愈合过程中表皮再生的影响,并探讨其细胞和分子机制.方法：采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记滞留技术标记Wistar大鼠的表皮干细胞(ESC)并制备全层皮肤缺损创面模型,以10mg/kg/d的血管紧张素转化酶抑制剂卡托普利进行腹腔注射处理为实验组；腹腔注射生理盐水为对照组,观察创缘ACE的表达与BrdU标记滞留细胞比值变化,连续动态观察再上皮化过程中再分布的ESC与ACE表达的关系,探讨ACE抑制剂对皮肤创伤愈合的影响.另外,离体培养ESC,检测ACE在ESCs的表达.用XTT法检测ACE抑制剂卡托普利对ESCs增殖的影响；体外创伤模型观察卡托普利对ESCs迁移能力的影响；流式细胞仪检测K10的表达观察卡托普利对ESC分化的影响；细胞克隆形成率分析和细胞粘附能力分析观察卡托普利对ESC的影响；ELIAS法检测细胞上清液中Ang Ⅱ和Ang1-7的变化,观察ACEI作用ESC的底物.Western blot法观察ACE抑制剂处理前后ESC细胞外信号调节激酶(ERK)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、信号转导和转录激活因子(STAT1,STAT3)磷酸化的变化,探讨其可能的信号机制.结果：在Wistar大鼠皮肤创伤模型中,ACEI抑制创面愈合,第7天最为明显(对照组77.65±6.45,实验组：63.12±9.95,P＜0.05)；ACEI明显任同一时间降低创缘Brdu阳性细胞率,亦在第7天最为明显(对照组：6.52±0.76,实验组：5.02±0.65,P＜0.05).在体外培养的细胞经β1-整合素和K19免疫荧光双重标记染色,83.55％细胞为双标记阳性细胞,即ESCs.免疫荧光染色和RT-PCR结果显示ESC表达ACE.流式细胞仪定量检测培养的细胞ACE阳性率为74.2％.10-6mol/l的卡托普利明显抑制了ESCs的增殖(P＜0.05),且在第5天达到峰值.10-6mol/l的卡托普利明显抑制了细胞的迁移能力(P＜0.05)、粘附能力(P＜0.05)和克隆能力(P＜0.05).流式细胞仪检测结果表明：10-6mol/l的卡托普利并没有影响K10的表达(P＞0.05).Elisa法检测卡托普利处理前后表皮干细胞上清液中的变化,表明ACEI可能抑制ESC产生AngⅡ,但并不影响Ang1-7的产生.另外,Ang Ⅱ通过AT1受体促进ERK磷酸化,从而导致ESC的增殖、迁移；Ang Ⅱ通过AT2受体抑制ERK磷酸化,从而抑制表皮干细胞的增殖、迁移.结论：ACE通过调节表皮干细胞的增殖、迁移,进而影响表皮的再生.ACEI通过抑制ACE活性,调节Ang Ⅱ的产生起作用.Ang Ⅱ通过AT1和AT2受体调节表皮干细胞的生物学功能,从而影响皮肤表皮的自我更新和损伤后的再生.我们的研究为揭示ACE在皮肤损伤修复中的作用以及口服ACEI所产生的皮肤副反应的机制提供了证据.
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