食源性致病菌六联融合毒素的构建及免疫学特性研究

• 作 者: 官彬彬[1]于师宇[1]孟宪梅[1]卢士英[1]任洪林[2]柳增善[1]王克坚[3]
• 机 构: 吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病教育部重点实验室,吉林长春 130062
• 出 处: 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会
• 发表日期: 2008年期

[目的]构建四种食源性致病菌融合毒素基因及重组表达载体。制备六联融合毒素的血清抗体。
[方法]采用柔性Linker序列(G-G-G-G-S)对目的基因进行串联(HblA-VT1B-SEA-VT2B-BoNTaHc-SEB)，构建重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中进行表达，将表达蛋白纯化后免疫豚鼠制备血清抗体，利用ELISA和琼脂扩散试验验证抗体的特异性与敏感性。
[结果]成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中成功表达，37℃表达蛋白主要以包涵体形式存在(表达量10.2％)，基因序列全长3384bp，编码1127个氨基酸，蛋白分子量为127205，测序结果与设计序列一致性为100％。ELISA和琼脂扩散试验表明，融合毒素F6与四种食源性致病菌有良好的反应原性，与多种非目标菌不反应。
[结论]成功的构建了多联融合毒素基因的表达质粒及制备了抗血清。为利用融合毒素的方法检测食源性致病菌，进而建立食源性致病菌广谱、快速的检测方法奠定基础。