【摘 要】
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研究人bcl-2基因高表达能否抑制人低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2)发生Anoikis效应及其相关机理.方法:将带有人bcl-2的cDNA真核表达载体pSFFV-bcl-2-neo,用脂质体转染法导入CNE-2
【机 构】
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中山医科大学生物化学教研室(广州)
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研究人bcl-2基因高表达能否抑制人低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2)发生Anoikis效应及其相关机理.方法:将带有人bcl-2的cDNA真核表达载体pSFFV-bcl-2-neo,用脂质体转染法导入CNE-2细胞株中.用流式细胞仪根据免疫荧光定量法筛选高表达bcl-2单细胞克隆株.用振摇及polyheme覆盖培养皿等方法防止细胞粘附,建立Anoikis模型;抽取细胞DNA观察其是否发生片段化;用双染色法(YO-PRO-1/PI)检测细胞凋亡及其比例;用Western Blot方法检测其caspase3,PARP等蛋白被激活情况.结果:成功转导人bcl-2基因到CNE-2细胞株中,并筛选出高效表达的单细胞克隆株.与对照CNE-2细胞株相比,该细胞株有很强的抵抗由振荡及Polyheme等手段所诱导的Anoikis.其caspase3,PARP等蛋白未见明显裂解.结论:bcl-2在CNE-2细胞株中的高效表达可显著抑制由振摇及Polyheme等手段所诱导的Anoikis.
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