【摘 要】
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我们设计了一种简单、易操作、基于磁珠-酶放大的荧光免疫方法检测猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)抗体,通过对血清中抗体的测定来判断是否发生APP感染.首先,将APP特异性的抗原
【机 构】
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华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉,430070
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我们设计了一种简单、易操作、基于磁珠-酶放大的荧光免疫方法检测猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)抗体,通过对血清中抗体的测定来判断是否发生APP感染.首先,将APP特异性的抗原蛋白ApxivA包被在磁珠表面；然后加入待检测的血清样品,温育、清洗；再次加入辣根过氧化酶抗过氧化酶(HRP)标记的兔抗猪IgG,温育,清洗.当血清中存在相应的待检测抗体时,酶联免疫反应发生.HRP能催化H2O2氧化底物对羟基苯乙酸(p-HPA)产生具有很强荧光信号的物质联苯乙酸(DBDA).而DBDA荧光强度与待检测抗体浓度之间存在正比关系.因此,可以通过测定DBDA的荧光强度来间接反映血清中待检测抗体的浓度,以此来判断猪感染此病的严重程度.在最优的条件下,我们在标准阳性血清160-5120倍稀释范围内获得了很好的线性关系,相关系数达0.997.其检测线可以达到10240倍稀释,而传统ELISA方法只能做到320倍稀释.同时,我们用该方法做了78份临床样品的检测,并与传统ELISA检测结果进行了对比.发现,此方法与ELISA方法存在很好的符合率,达89.7％.
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