【摘 要】
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本研究旨在探究Nanos2对雄性生殖细胞分化生成过程中的生物学功能,为完善鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据.qRT-PCR检测成体
【出 处】
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江苏省畜牧兽医学会2017年学术年会
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本研究旨在探究Nanos2对雄性生殖细胞分化生成过程中的生物学功能,为完善鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据.qRT-PCR检测成体公母鸡不同组织中Nanos2表达情况,分别构建过表达载体pcDNA3.0-Nanos2和敲除载体Nanos2-g1、Nanos2-g2和Nanos2-g3,并通过Cas9/gRNA体外酶切和T7E1酶切反应检测敲除载体活性.在体内、外两个水平对Nanos2进行过表达和敲除,以qRT-PCR、细胞免疫化学、PAS染色和流式细胞分析等方法检测雄性生殖细胞分化情况.Nanos2在公母鸡所取组织中均有表达,且除性腺外在其他组织中表达趋势一致,但在睾丸中高表达,在卵巢中低表达;成功构建过表达载体,经过酶切和测序验证无误;成功构建Nanos2-g1、Nanos2-g2和Nanos2-g3敲除载体,Cas9/gRNA体外酶切和T7E1酶切反应检测Nanos2-g1敲除活性最佳;在体内、外,过表达Nanos2能够明显加速类胚体(Embryoid Body,EB)和精原样细胞(Spermatogonia stem cell like cells,SSC-like cells)的生成,促进cvh、c-kit和integrinα6等表达量上调,并且显著促进原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)和精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)的生成,而敲除Nanos2却延阻EB和SSCs-like的产生,并且cvh、c-kit和integrinα6的表达量下调,PGCs和SSCs生成的效率受阻.过表达Nanos2能够有效促进家鸡ESCs向雄性生殖细胞分化,而敲除Nanos2却能反向抑制ESCs向雄性生殖细胞分化,表明Nanos2在家鸡ESCs向雄性生殖细胞的分化过程起到重要的调控作用.
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