【摘 要】
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本研究旨在建立一种联合应用纳米免疫磁珠富集技术和量子点荧光标记技术对怀有非整倍体胎儿的孕妇进行无痛性产前诊断的方法。在优化的条件下，比较使用不同的密度梯度离心液Ficoll 1077、Percoll 1075与Percoll 1090双倍密度梯度离心液、Percoll 1090细胞分离液离心后所分离新生儿脐血的有核红细胞的数量和纯度。通过EDC化学偶联法将磁性纳米颗粒与抗CD71单克隆抗体共价偶联
【机 构】
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吉林大学第二医院医学研究中心 吉林长春 130041 吉林大学第二医院妇产科 吉林长春 13004
【出 处】
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第九届全国生物医学体视学学术会议、第十二届全军军事病理学学术会议暨第八届全军定量病理学学术会议
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本研究旨在建立一种联合应用纳米免疫磁珠富集技术和量子点荧光标记技术对怀有非整倍体胎儿的孕妇进行无痛性产前诊断的方法。在优化的条件下，比较使用不同的密度梯度离心液Ficoll 1077、Percoll 1075与Percoll 1090双倍密度梯度离心液、Percoll 1090细胞分离液离心后所分离新生儿脐血的有核红细胞的数量和纯度。通过EDC化学偶联法将磁性纳米颗粒与抗CD71单克隆抗体共价偶联，通过透射电镜观察偶联前后的磁性纳米颗粒的形态变化：应用考马斯亮蓝法测定优化条件后蛋白的偶联率：用免疫荧光法检测到偶联后的抗体是否具有活性；细胞结合能力实验检测偶联物能否分离富集新生儿脐血中的有核红细胞；新生儿脐血模型检测偶联物分离效率。采用改进水相法在水溶液中直接合成经过巯基丙酸修饰的水溶性CdTe荧光量子点，用荧光光度计测量荧光量子点的荧光光谱；通过EDC法将水溶性CdTe荧光量子点与抗胎儿特异性血红蛋白抗体相偶联，制备抗胎儿特异性血红蛋白抗体的荧光量子点荧光探针，荧光光度计测量荧光量子点探针的荧光光谱，比较偶连抗体前后的荧光量子点的荧光光谱的变化；应用荧光量子点探针免疫荧光法对脐血有核红细胞的标记，并与免疫细胞化学法相比较；光漂白实验检测量子点的荧光稳定性；对从孕妇外周血中磁性分离的胎儿有核红细胞进行量子点荧光鉴定。用痕量基因组DNA提取试剂盒提取经过磁性富集量子点鉴定的孕妇外周血中胎儿有核红细胞的DNA，用实时荧光定量PCR检测样品基因组DNA的唐氏综合征关键区域与阳性对照的相对定量。
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