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目的:探索分离纯化甘薯sporamin蛋白的方法,观察sporamin蛋白对3T3-L1前脂肪细胞分化与增殖的影响。
方法:利用硫酸铵沉淀、离子交换、凝胶过滤层析及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的方法对“55-2”甘薯中的sporamin蛋白进行分离纯化。然后,用不同浓度sporamin(0.000,0.025,0.125,0.250,0.500,1.000mg/ml)处理3T3-L1前脂肪细胞,以黄连素为阳性对照,分别用油红O染色和MTT法观察sporamin蛋白对前脂肪细胞分化和增殖的影响。
结果:经离子交换、凝胶过滤层析及SDS-PAGE纯化可得到高纯度的sporamin蛋白。随着sporamin蛋白浓度的增加对前脂肪细胞分化抑制作用显著增强。当sporamin蛋白浓度增至0.500 mg/ml时,镜下油红O染色区域和洗脱液吸光度值降至最低(p=0.0001)。此外,不同浓度sporamin对前脂肪细胞的增殖均有不同程度的抑制作用,浓度越高,抑制效果越强烈。
结论:用本试验方法提取纯化的sporamin蛋白能抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化和增殖,具有潜在的减肥作用。