【摘 要】
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[目的]制备磺胺母核(SH)单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行检测.[方法]采用混合酸酐法将本实验室合成的磺胺类药物母核结构药物(SH)偶联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上,合成免疫原BSA-SH 和包被原OVA-SH,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE 法进行鉴定.用BSA-SH 免疫Balb/c 小鼠,间接ELISA 和间接竞争
【机 构】
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新疆农业大学动物医学学院 乌鲁木齐 830052;北京农学院动物科学技术学院 北京 102206
【出 处】
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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周
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[目的]制备磺胺母核(SH)单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行检测.[方法]采用混合酸酐法将本实验室合成的磺胺类药物母核结构药物(SH)偶联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上,合成免疫原BSA-SH 和包被原OVA-SH,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE 法进行鉴定.用BSA-SH 免疫Balb/c 小鼠,间接ELISA 和间接竞争ELISA 法筛选细胞融合备用鼠；应用杂交瘤技术建立SHmAb 细胞株,用体内诱生腹水法制备SH mAb,对 SH mAb 的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定.[结果]BSA-SD 人工抗原制备成功,SH 与BSA 的分子结合比约为11.6：1.筛选出5G1、5G2 和8D2 3 株敏感特异性的杂交瘤细瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1：6.40×102、1：1.28×103和1：3.20×102,腹水效价分别为1：2.56×105、1：5.12×105和1.28×105. 5G2 株对SH 的半数抑制浓度(IC50)为82ng？ml-1.纯化后抗体对磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺对甲氧嘧啶(SMD)、磺胺甲基嘧啶(SM)、磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺醋酰(SCT)、磺胺氯吡嗪钠(SCZ)、磺胺噻唑(ST)、磺胺甲噁唑(SMZ)、磺胺苯吡唑(SPH)、磺胺二甲嘧啶(SM2)、氨苯磺胺(SSF)和磺胺喹噁啉(SQ)的交叉反应率分别为：108％、86％ 105％、85.6％、72％ 、26％、32％、54.6％、43％、4.6％、0.5％和76％ [结论]获得了抗磺胺母核SH 高效价、敏感、特异的mAb,从而为研制磺胺药多残留检测试剂盒和胶体金免疫层析试纸条奠定基础.
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