CRISPR/Cas9系统敲除水稻基因的研究

来源 :中国植物病理学会第十二届青年学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liliqqqq
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  CRISPR/Cas9系统是近年来开发的一种高效的核酸定点编辑技术,在很多物种中进行着实验.本研究利用CRISPR/Cas9系统,高效地对水稻基因进行敲除,为研究基因功能提供了良好的材料.利用网站CRISPR-Plant设计靶序列,构建到Cas9载体,转化农杆菌后,侵染水稻愈伤.随后筛选抗性愈伤,培养出转基因植株,并检测转基因水稻苗的突变类型及效率.分析检测结果发现,转基因T0代植株突变率高达98%,主要以插入突变为主,占76.1%,其中70%为单碱基插入;缺失突变占23.9%,缺失碱基长度在1~17碱基对之间.同时随机挑选了几个基因进行脱靶检测,没有发现脱靶现象.利用两个农杆菌共侵染愈伤,获得了预期的双敲除突变体,双敲除效率高达75%.此外,在同一个载体中设计了针对同一个基因的两个靶位点,在对其抗性愈伤的检测中发现在两个靶位点之间发生了大片段的缺失,也存在缺失位置不完全在两个靶位点之间.由此可见利用CRISPR/Cas9系统能够高效的获得水稻突变体.
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