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本实验室以往研究发现L-型钙通道功能改变在脑缺血后海马神经元死亡过程中发挥了重要的作用，然而其作用的机理目前仍不清楚。为探讨L-型钙通道参与缺血性神经细胞死亡的机制，寻找其可能的下游信号分子及转导通路，我们利用GST-pull down技术研究大鼠海马L-型钙通道相互作用蛋白在短暂性前脑缺血后的变化。根据GenBank登录的α1C基因的编码核苷酸序列，设计合成针对其C末端(1808-2139)编码序列的特异性引物，从pcDNA3/α1C质粒上PCR扩增出其C末端基因，插入融合表达载体pGEX-KG中，经测序鉴定后，转化BL21感受态细胞，在含氨苄青霉素的LB中诱导表达。表达的GST-α1C融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖4B亲和层析纯化，并以抗α1C抗体为一抗，羊抗兔为二抗，进行Western blot验证。同时，采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法制备大鼠前脑缺血模型，在缺血再灌流24小时后提取海马组织蛋白，分别与纯化后固定于谷胱苷肽琼脂糖珠的GST-α1C、GST蛋白共同孵育，通过SDS-PAGE检测与L-型钙通道α1C亚基C末端相互作用的蛋白。结果显示缺血组与假手术组相比出现三条差异蛋白条带，并均未见于GST蛋白对照组。其中两条在缺血后与L-型钙通道结合减少，一条与L-型钙通道结合增加，说明在大鼠海马组织中存在与alpha1C亚基C末端片断相互作用的蛋白，且部分与L-型钙通道结合的蛋白在缺血过程中发生了变化。本研究成功构建了含L-型钙通道α1C亚基C末端编码序列的pGEX-KG/α1C融合蛋白表达载体，并在原核细胞中表达、纯化。通过GST-pull down的方法观察到大鼠前脑缺血后L-型钙通道相互作用蛋白的变化，提示这些差异蛋白与L-型钙通道的结合很可能参与了缺血/缺氧性脑损伤，为下一步研究L-型钙通道参与缺血性神经细胞死亡的机制奠定基础。