【摘 要】
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目的；肿瘤转移是导致胃癌患者死亡的重要原因,而肿瘤细胞对化疗药物产生耐受则导致化疗失败、肿瘤复发,构成肿瘤转移的基础.研究肿瘤耐药性产生的分子机制,发展有效的肿瘤耐药性逆转策略将为提高化疗效果,抑制肿瘤转移提供科学依据.DNA 修复能力增强是肿瘤细胞对顺铂产生耐药性的重要原因.本课题组回顾性胃癌队列研究表明碱基切除修复分子XRCC1 与铂类药物化疗效果呈负相关性,但XRCC1 如何调节胃癌细胞顺铂
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院 挪威科技大学
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目的；肿瘤转移是导致胃癌患者死亡的重要原因,而肿瘤细胞对化疗药物产生耐受则导致化疗失败、肿瘤复发,构成肿瘤转移的基础.研究肿瘤耐药性产生的分子机制,发展有效的肿瘤耐药性逆转策略将为提高化疗效果,抑制肿瘤转移提供科学依据.DNA 修复能力增强是肿瘤细胞对顺铂产生耐药性的重要原因.本课题组回顾性胃癌队列研究表明碱基切除修复分子XRCC1 与铂类药物化疗效果呈负相关性,但XRCC1 如何调节胃癌细胞顺铂耐药性的分子机制仍不清楚.方法：采用胃癌细胞株BGC823,浓度梯度法诱导产生顺铂耐药亚株BGC823/DDP；检测顺铂耐药亚株的DNA 修复能力及XRCC1 的表达；二维电泳—质谱法检测顺铂耐药亚株与亲本株的蛋白质组差异,分析蛋白质组差异与DNA 修复之间的相关性；结合药敏实验分析XRCC1 与铂类方案敏感性间相关性.结果：成功构建耐药指数为18.9 的顺铂耐药亚株,BGC823 细胞IC50 值0.85μg/ml,而BGC823/DDP 细胞IC50 值为16.09μg/ml.BGC823/DDP 细胞DNA修复能力显著增强,相同剂量的顺铂(1μg/ml)处理BCG823 细胞和BGC823/DDP细胞,γH2AX 染色结果显示BGC823/DDP 阳性率显著低于BGC823(P＜0.001)；免疫印迹结果显示BGC823/DDP 细胞中XRCC1 表达显著增加；在BGC823 细胞中转RFP-XRCC1 表达质粒上调XRCC1 表达可以显著抑制顺铂诱导的DNA损伤(P＜0.001)及细胞凋亡(P＜0.01)；在BGC823/DDP 细胞中转染XRCC1 shRNA质粒抑制XRCC1 表达可以显著增加顺铂诱导的DNA 损伤(P＜0.001)及细胞凋亡(P＜0.01)；XRCC1 与DNA-PK 相互作用,通过非同源重组修复途径介导顺铂诱导的DNA 损伤修复过程；BGC823/DDP 细胞对伊立替康无交叉耐受性,伊立替康抑制BGC823/DDP 细胞中XRCC1 的表达,伊立替康联合顺铂显著杀伤BGC823/DDP 细胞,提高其对顺铂的敏感性；二维电泳—质谱法检测发现BGC823/DDP 细胞中TXNL1 表达显著下降；TXNL1shRNA 抑制BGC823 细胞TXNL1 表达可以上调XRCC1 表达,而flag-TXNL1 表达质粒回BGC823/DDP细胞中TXNL1 表达可以下调XRCC1 表达；TXNL1 通过泛素—蛋白酶体途径负调控XRCC1 表达；在23 例经药敏检测的胃癌标本中,TXNL1 和XRCC1 的表达呈负相关性(P＜0.05),与铂类化疗方案的敏感性相关.结论：本研究首次阐明XRCC1 在胃癌细胞顺铂耐药性产生过程中的重要作用及其分子机制,揭示了伊立替康作为铂类方案耐药患者二线治疗首选药物的分子机制；首次发现TXNL1 通过泛素—蛋白酶体途径调控XRCC1 表达及TXNL1-XRCC1 作为胃癌患者个体化治疗标志物的潜在价值.
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