【摘 要】
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高密度脂蛋白(High-density Lipoprotein,HDL)是血浆中重要的脂蛋白,其主要成分为载脂蛋白A-I(Apoliprotein A-I).载脂蛋白A-I参与胆固醇逆向运转,在脂蛋白代谢、抗菌等
【机 构】
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中国科学院南海海洋研究所中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室 广东省广州市海珠区新港西路164号 510301
【出 处】
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第五届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛
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高密度脂蛋白(High-density Lipoprotein,HDL)是血浆中重要的脂蛋白,其主要成分为载脂蛋白A-I(Apoliprotein A-I).载脂蛋白A-I参与胆固醇逆向运转,在脂蛋白代谢、抗菌等方面发挥极其重要的作用.石斑鱼是我国广东、福建等南方沿海各省,港、澳、台及东南亚地区和国家最重要的海水养殖名贵鱼类之一,经济价值极高.但是石斑鱼病害也非常严重.因此石斑鱼养殖生产上迫切需要各种疾病的防治对策.本论文通过RACE技术首次克隆得到了石斑鱼ApoA-I基因的cDNA全长,命名为Ec-ApoA-I (1278bp).ORF预测和氨基酸序列分析表明,该蛋白编码264个氨基酸.Ec-ApoA-I主要在肝脏和肠道中表达.当石斑鱼受到SGIV刺激时肝脏中的Ec-ApoA-I表达量会不同程度的上升.免疫荧光结果显示Ec-ApoA-I主要在细胞质和细胞核中均有表达,但主要在细胞质中表达.为了大量制备给蛋白,尝试利用酵母表达系统高效表达Ec-ApoA-I.通过PCR扩增到Ec-ApoA-I的基因片段,将其插入到酵母Pichia pastoris分泌型载体PPIC9K上,Bgl Ⅱ酶切线性化后,电转化P.pastoris GS 115,将获得的1000多个转化子依次在含有不同浓度G418浓度的YPD平板上筛选高抗性转化子,得到的10个转化子经甲醇诱导,SDS-PAGE检测得到3株高表达菌株.以上研究结果为大批量制备石斑鱼ApoA-I蛋白,防控石斑鱼病害奠定了基础
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